半夜三点，细胞房为何传来师兄的痛哭？
细胞状态不好，是我的锅还是天气的错？
血清颜色不好不用，你学生物还是学看相？
胎牛血清（fetal bovine serum）是一种取自牛胚胎的血清，常用于配置动物细胞的培养基。胎牛血清含有各种生长因子，且抗体含量少。维基百科
胎牛血清是细胞培养中的重要工具，如何判断它的质量高低，是一个历史悠久的话题。今天，我们尝试从COA这个角度帮助大家判断手上的胎牛血清质量如何。
读完这篇文章，你可以掌握以下几点能力：
- 明白COA是什么，有什么用
- 明白COA里面的关键指标，并知道它们的意义
- 快速从一份COA中判断该批次胎牛血清的质量
- 能解答一些常见的血清使用上的问题
COA是什么，有什么作用
COA全称Certificate of Analysis，它是厂家按照一定的质量标准和规范来对产品进行的一系列的性能指标测试，说人话就是：质检报告。
除了胎牛血清，我实在想不出市场上还有哪个产品能让用户对COA如此关心。究其根本原因，一方面在于我国对爆发过疯牛病、口蹄疫的国家采取极其严格的血清入口政策，另一方面在于用户巨大的需求和品牌依赖。
COA能证明这个批次的胎牛血清在出厂时的质量如何，但无法证明你手上拿着的这瓶同批次的胎牛血清质量如何。
一批次的胎牛血清从出厂到用户手上，经历了跨境货运、报关、检疫、境内冷链仓储和配送。只有当每个环节都符合要求时，你手上的COA才有意义。
可能你会问，那我手上的COA有什么用呢？答案是肯定的，有用。怎么用？继续往下看。
第一步，你需要先看明白COA。
为了帮助大家快速上手，我从ThermoFisher官网下载了从年共94份南美来源的胎牛血清COA文件。
经过整理和统计后，我将结合国家制定的标准来帮助大家解读。
我认为，要读懂胎牛血清的COA，最基础的要求是搞明白其中的4项关键指标。分别是：
COA关键指标 : 有害微生物
牛血清制品应过滤除菌后制成，不能含有牛腹泻病毒，不能含有噬菌体、支原体、真菌污染。《中国生物制品主要原辅料质控标准 2000年版》
首先，胎牛血清不能含有有害微生物，包括细菌、真菌、支原体、噬菌体和国家规定的特定病毒。
所以，任何批次的胎牛血清，其上述质检必须要做，而且结果必须为不能检出。我们看看赛默飞的这款血清的COA内容：
a01,a02,a04分别为细菌、真菌和支原体，检测结果均为阴性；a15,a25,a35分别为牛腹泻病毒、III型副流感病毒和牛传染性鼻气管炎病毒，结果均为阴性。
所有批次的COA均显示以上6个指标的结果全部为阴性。
COA关键指标 : 内毒素
血清中细菌内毒素含量不应高于10 EU/ml《中国生物制品主要原辅料质控标准 2000版》
内毒素来源于革兰氏阴性菌的细胞壁成分，主要化学成为脂多糖LPS。当细菌死亡溶解时释放。内毒素容易刺激细胞产生免疫反应，有一定毒性作用。
2000年版的国内生物制品质控标准明确指引了血清内毒素含量的最高上限为10EU/ml，到了2005年的中国药典更是将此标准提高到<5EU/ml。
我们来看看这一款产品的质检结果：
数据来源于66个批次，单位EU/ml
由于2013以前的COA并没有提供内毒素这个检测项目结果，所以只能从有提供的66个批次中统计。
发现80%批次的内毒素含量均低于10EU/ml，且含量很低，低至0.4EU/ml。剩余20%共14个批次的内毒素含量不满足国内制定的标准，部分超标甚至特别离谱，居然最高达到了84EU/ml.
看来国外的月亮不怎么圆啊。（手动狗头 :P）
COA关键指标 : 总蛋白含量
血清中蛋白质含量应该在3.5%~5%（w/V）《中国生物制品主要原辅料质控标准 2000年版》
这个指标的意义在于判断该批次胎牛血清的牛龄。
胎牛血清的采集对象是指在母牛体内5-8个月牛龄的胎牛，随着胎牛在母牛体内逐步发育成熟，它的血清中的蛋白质含量也会不断增高。
如果蛋白质含量太高，说明胎牛血清采集的时间可能较晚，甚至是小牛出生后再采集的。
如果太低呢？有可能在生产过程中人为稀释了血清。所以品质好的胎牛血清，其蛋白质含量不能太高、也不能太低。在标准范围内即可。
那我们继续看看这款产品的COA指标：
可以看出批次间的结果是相当稳定的，不满足国内标准的只有4个批次，剩余的基本上在3.8-4.6g/100ml之间。从一定程度上也反应了国外的血清采集标准高，且工艺成熟。
COA关键指标 : 血红蛋白
血清中血红蛋白含量不应高于 0.02% (w/v)《中国生物制品主要原辅料质控标准 2000年版》
国内质控标准对牛血清进行了描述定义：浅黄色、澄清、稍粘稠的液体，且无溶血、无异物。
不少用户反馈，不同批次的血清的颜色会有不同，有的偏黄、有的偏红。市场上甚至还流行过通过看颜色是否红润来判断血清质量高低的说法。
其实，胎牛血清颜色有的深有的浅，我认为都是正常现象。
因为胎牛尚未完全发育，因此其凝血功能不完善，所以采集血清时难以避免溶血。只要有溶血，就会出现血红蛋白溢出到血清中。
决定血清色泽的因素是血红蛋白和胆红素，前者含量高，则呈现偏红的颜色，后者高则呈现为金黄色。不能简单的以颜色深浅来判断其质量好坏。
需要注意的反而是COA中血红蛋白含量是否在标准范围内，因为血红蛋白超标，意味着血清采集过程出现了比较严重的溶血现象。从一定程度上反映了采集流程的不规范和不严谨。
最后，我们再看看这94个批次的结果：
把单位换算过来后，我们可以发现，超过20mg/100ml的就等于不满足国家标准了。94个批次只有1个批次超出了，其余的都在标准范围内。
而且从结果来看，批次之间的差异也是比较大的，也正好反映了刚才的问题，不同批次的血清，用肉眼观察，颜色有较大的差异存在。
我认为，COA不是万能的，但有实际价值。
有这份报告，可以帮助我们分析、判断该批次血清是否存在质量隐患。
通过观察连续批次的COA，可以判断该品牌的血清生产工艺、血清品质是否稳定。
对其中关键指标例如内毒素、血红蛋白的分析，可以帮助我们找出日常实验遇到问题的原因。例如细胞状态好坏。
