解螺旋公众号·陪伴你科研的第2939天

没被细胞培养支配过的研究生涯不值得一过。刚刚，我细胞又污染了，文章又被拒了，导师逼我写份实验复盘，气氛都烘托到这了，我就借此机会先跟大家聊聊我们实验室《细胞人的悲惨世界》。

作为一枚实验室打工人，来实验室的时间不长，我却见识了同门养细胞的各种悲惨往事。如下：

我有一个师弟，刚进实验室还没学会养细胞，就因为用烧杯煮咖啡，吃泡面，住进了医院，好在没啥生命危险，导师吓得已经把他列入实验室黑名单。

我有一个师妹，很自信，养了半个月的细胞突然全军覆没，她心态彻底崩了，只能靠恋爱缓解失去细胞宝宝的痛。

我有一个师兄，发现细胞污染了，一时心软外加生性节俭，没舍得扔，导致整个实验室的细胞受到污染，最后把所有细胞连同耗材培养基全部弃去，影响了自己及整个实验室的进度不说，结果不幸延毕了。

我还有一位师姐是养细胞高手，实验室每个人都在问她同一个问题：“师姐，师姐，我细胞又污染了，这可咋办呀？”

一开始师姐还很热情的帮我们找原因，后来她不堪其扰，就为我们写了篇人人传诵的 《实验室小白七不要》，一毕业就拉黑了我们养细胞很菜的人。

以她多年的养细胞经验来说，一般实验室新手细胞污染出现的原因可以从七个方面来着手解决。只要你熟读并背诵以下《实验室小白七不要》，养细胞之路从此顺风顺水，发SCI指日可待。现在我带大家预习下，避免悲剧再次发生。

一、不要丢弃 无菌观念， 乱穿戴，瞎吃喝

实验室人多口杂，难管理。刚进实验室的同学往往会抱着懒惰和侥幸心理，有时候进细胞房懒得换鞋套，懒得戴口罩，甚至不戴手套，帽子，还有人在实验室用烧杯冲咖啡，煮泡面。

要知道，换鞋是为了隔离真菌。戴口罩是为了防止口腔支原体污染细胞。不戴手套，根本就清除不掉手上的细菌真菌。至于在实验室吃喝就等于自杀，造成污染就不说了，关键是你还想活着走出实验室吗？

如果你明知道，以上不规范行为，是实验室大忌讳，还要犯，那你真没救了。

请大家一定要记住：进无菌室前洗手，按规定穿隔离衣；动作要轻，不要交头接耳；使用培养液前不宜过早开瓶；吸取培养液、细胞悬液时，专管专用。

二、不要乱摆放堆积实验用品

生物安全柜里操作时，门前最忌讳堆一堆杂七杂八的东西，然而，有的同学枪头盒、血清、管子，培养皿、移液器、酒精喷壶、酒精灯，堆积如山，都没有好好整理过它们。

你要知道，一旦它们堵住了安全柜门前的出风口，就会有双重不良影响。这样子实验操作起来会容易手忙脚乱，导致动作幅度过大，扰乱气流。

还有就是，这些堆积的实验用品一旦挡住风口，也会扰乱生物安全柜的气流，气流变化会导致外部不洁净的空气流入，也同样会导致生物安全柜的洁净作用失效。

三、不要乱用紫外线和酒精灭菌

紫外和酒精最多只能灭细菌，对真菌伤害很小。有的同学竟然不戴手套，仅用喷壶喷手。超净台要尽量用酒精棉球而不是用酒精喷壶，因为用酒精棉球的话，可以在灭菌的同时把菌体从手上擦下去，而喷壶只能短暂的灭了下菌而已。有这个毛病的同学，记住一句话就行了，多用棉球，少用喷壶。

四、不要忘记定期清理水浴锅

水浴锅是实验室比较容易忽视的一种存在，复苏细胞的时候，37℃对细菌真菌来说就是温床。复苏细胞后，湿漉漉的冻存管，任你再怎么喷酒精也并没有什么意义了。

所以，一定要定期清洁水浴锅，在清洁时务必加一些抑菌剂。注意：不是要往里面加双抗，水浴锅里要加2%的硫酸铜，虽然这比较容易腐蚀水浴锅。总之，记住一定要定期清洁。

培养箱的水盘坐拥37℃温床的水环境，水盘里若是飘着特别大的一块块霉斑，一污染就一箱子全报废了，所以，一定要记住，培养箱要定期用0.1%的新洁尔灭或者84清洗，交替使用，防止微生物耐药。

预防水盘污染也很重要，水盘中加入饱和的磷酸氢二钠可以有效预防细菌真菌，但是需要定期加入去离子水防止析出。

要记住，细胞房所有在用的枪头，必须要经过湿热灭菌，用报纸包裹好枪头，这样做是因为灭菌锅一般在细胞房外面，所以要保证内部枪头盒洁净。

烤干是为了防止内部有水分，当你开启枪头盒后，有水的地方更容易被霉菌的孢子所接触附着，也就更容易污染，所以，灭菌灭不好的同学，一定要熟读并背诵下了这个灭菌法则，如若再不按规范操作，自己惩罚自己吧。

来跟我读：细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。

七、不要随意丢弃细胞，更不要不丢弃被污染细胞

如果你实验室条件有限，怀疑细胞污染了，建议大家试下细胞污染后的急救方法，方法如下，各位且背且珍惜。

首先要判断污染源，一旦发现细胞有污染的迹象或已污染，立即判断可能的污染源：有无操作不当？培养基、胰酶、PBS等颜色、澄清度是否正常？

其次要及时处理，若确定现有的培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用；若无法确定则新配完全培养基、PBS、胰酶，原有的液体在确定是否污染后再做处理。

如果是霉菌污染，在以PBS润洗2~3遍后换液，无需加入高浓度双抗。培养48h后污染再次出现时，再另行加入即可。

如果是真菌污染，在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B（两性霉素B有细胞毒性，不推荐使用），也可加入300μg/mL氟康唑培养，污染控制后改用150μg/mL培养2~3代

如果怀疑是支原体污染，则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂。也可购买环丙沙星注射液，于超净台内打开直接添加到培养基中，以20μg/mL浓度2代后改用10μg/mL浓度持续培养约2周。

如果是从别处转来或是自己所建的细胞系，要留有充足的冻存储备，一旦怀疑发生交叉污染，需要做好细胞遗传学方面的鉴定。

不过，尽管我认为不要随意丢弃未确认污染的细胞，应尝试挽救，但如若条件允许，细胞发生污染后最好的处理方式是：全部丢弃！！！

* 特别注意，确定污染的细胞千万不要留下，还记得前面师兄的遭遇吗？

我相信犯了以上这些养细胞罪状的实验菜狗，不止一个人，细胞培养中的常面临的BUG也远不止这些，所以，今天为了帮你解决细胞新手面临的种种难题，预防未来更多的细胞被我们误伤，耽误我们发SCI。

建议你可以先把这篇文章保存下来，当你遇到问题的时候再来看也许会更有感觉。

细胞培养是一个不断进步的过程，要想成为达人，看几篇文章哪够？在平时做好积累，量变才会有质变，师姐要求我们每个人都要读的《细胞培养（第3版）》则全方位介绍了细胞培养的方方面面，实为一本不错实验秘籍，收下即可顺利发SCI！

《细胞培养（第三版）》

必读理由一：带小白进入细胞界的“领路书"

本书作为研究生教学用书,简要介绍细胞培养的基础理论，较详细地叙述哺乳类动物细胞培养必需的用品器材、具体的操作步骤及操作提示等。手把手教你培养细胞，很适合小白入门。

必读理由二：细胞培养届的“百科全书”

本书除了细胞培养基本知识，细胞培养室的设置、设备和准备工作，细胞培养用液及培养基外，本书还补充了一些细胞培养的新技术，如三维细胞培养技术、各类肿瘤试验模型、诱导多能干细胞培养、细胞克隆形成及杂交瘤细胞制备等。一本书就可以掌握细胞培养术，高效又全面，可为大家节省不少搜集资料和经验的时间和精力。

必读理由三：补充了细胞培养新技术

内含细胞培养新技术：三维细胞培养，诱导多能干细胞培养，肿瘤干细胞培养。

必读理由四：细胞检测相关的仪器分析技术

内含细胞检测相关的仪器分析技术：流式细胞仪、激光扫描共聚焦显微镜、扫描电子电镜、透射电子电镜、原子力显微镜及活细胞工作站。

作为一本养细胞的经典书籍，这本书自诞生以来更是好评不断，我随手给大家放两条读者好评，供大家参考。

总而言之，它绝对是实验室打工人最需要的一本书，虽然网络上细胞培养的相关文章满天飞，但是内容不一定精确、齐全，所以如果你是准备进行细胞培养的人，那我们墙裂建议细胞新手，用这本书系统学习一下。

第一节 组织培养的诞生与发展简史

第二节 组织培养的优点、局限性及发展方向

三、组织培养的可能发展方向

第三节 组织培养常用术语

第四节 组织培养常用缩写词

第二章 细胞培养的基本条件

第一节 细胞培养实验室的建立

一、实验室设计原则与要求

三、细胞培养实验室的基本设备

第二节 培养仪器和材料

二、培养器皿与其他材料

三、培养用品的清洗和消毒

三、细胞培养所用液体的灭菌与保存

第三章 细胞培养的基本技术

二、微分干涉差显微镜技术

四、激光共聚焦扫描显微镜

第二节 流式细胞仪技术

第四章 体外培养的基本组织

二、单层柱状上皮细胞的培养

三、假复层纤毛柱状上皮细胞的培养

四、复层扁平上皮细胞的培养

二、神经胶质细胞的培养

第五节 细胞运动的观察

第六节 细胞培养的生长测定

第七节 细胞的冻存、复苏和运输

第五章 细胞系的建立和鉴定

di一节 正常细胞系的建立和鉴定

二、正常细胞系建立的例证

三、建立正常细胞系的讨论和小结

五、正常细胞系鉴定讨论及小结

第二节 癌细胞系、转化细胞系的建立和鉴定

四、癌细胞和转化细胞建系讨论和小结

五、癌细胞系和转化细胞系的鉴定

六、癌细胞和转化细胞系建立和鉴定的小结和讨论

第六章 细胞周期分析与细胞克隆化技术

di一节 细胞周期概述

第三节 细胞同步化方法

一、使细胞同步化在Go／G1期方法

二、使细胞同步化在G1期

三、使细胞同步化在G1／S期交界点

四、使细胞同步化在有丝分裂期（M期）

一、流式细胞仪分析细胞周期

四、测定细胞周期的其他方法

第五节 细胞克隆的概念及培养方法

一、细胞克隆的基本概念

二、细胞克隆的培养方法

di一节 器官培养的要求

第二节 器官培养技术的特点

第三节 器官培养的方法

一、固体培养基器官培养法

二、液体培养基器官培养法

第四节 器官培养的应用

一、器官培养在胚胎发育研究中的应用

二、器官培养在器官功能及其代谢研究中应用

三、器官培养在肿瘤侵袭研究中的应用

二、胚胎干细胞的形态特征及其鉴定

一、神经干细胞的概念及生物学特征

二、神经干细胞的分离与培养

一、造血干细胞的定义及生物学特征

二、造血干细胞的分离及培养

一、从骨髓细胞中分离MSC细胞

二、流式细胞仪分离鉴定MSC

三、MSCs克隆形成试验

四、人的MSC细胞系培养

五、MSC细胞向脂肪细胞谱系分化

六、MSC诱导分化为软骨细胞软骨细胞团试验

七、MSC诱导分化为成骨细胞谱系

八、不同组织来源的MSC的特殊表面标志

第五节 表皮组织干细胞

一、移植人皮肤培养表皮干细胞

二、角质形成细胞的鉴定

一、人胰腺导管制备胰岛干细胞

二、从小鼠胚胎干细胞系定向诱导分化为胰岛干细胞

第七节 鉴定干细胞及分化细胞类型的标志

第八节 体细胞重编程为多能干细胞

第九章 细胞培养在细胞分化研究中的应用

第十章 细胞培养在细胞衰老、凋亡研究中的应用

第十一章 细胞融合与单克隆抗体制备

第十二章 细胞培养的应用

第十四章 细胞培养常见问题解答

附录Ⅰ 实验室常用的细胞系（株）

附录Ⅱ—1 常用缓冲液

附录Ⅱ—2 其他缓冲液的配制

附录Ⅲ 常用人工合成细胞培养基

附录Ⅳ 细胞培养常用英语词汇

生物学、医学等相关专业学生

生物、医学科研相关从业人员

正在实验室打工或是即将进入实验室的你

最后，祝你的细胞宝宝健康成长，积极献身于伟大的实验事业！大家对细胞培养方面还有什么想要了解的，都可以留言中告诉我哦~我将在线为各位答疑解惑！

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