急急急！荧光定量pcr的ct值怎么分析得到相对表达量！ - 分子生物 - 小木虫 - 学术 科研 第一站
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急急急！荧光定量pcr的ct值怎么分析得到相对表达量！
我做了两个对照组和三个实验组，一共测七个因子，怎么分析各个组的因子相对表达量啊！麻烦各位帮忙了！下面是我得一组数据，帮忙看下吧！
& && & 目的基因（ct值）& &&&内参基因（ct值）
对照组一&&20.74& && && && && && && && & 13.48
对照组二& &22.47& && && && && && && &&&13.67
实验组一&&21.71& && && && && && && && &12.75
实验组二 22.55& && && && && && && && &&&13.27
实验组三&&22.71& && && && && && && && & 12.73
这是我其中一个因子的数据，麻烦各位高手支招了！谢谢了！
对照组为什么只有两组呢？
实验组却是3组。 直接比就可以啊，你的标准曲线好吗？ : Originally posted by sushang at
对照组为什么只有两组呢？
实验组却是3组。 两个对照组分别是阴性和阳性对照组 实验组是不同浓度的药物干预 : Originally posted by 铁锤媳妇 at
直接比就可以啊，你的标准曲线好吗？ 我看我师姐他们的论文都是算出相对表达量的啊 用双Δct法 我知道公式 不知道具体怎么算 帮帮忙啊 各位高手 急求 你先用你的实验组的每一个样的目的基因的Ct值减去内参基因的
将上述的结果取2的负对数
举个例子说，你的第一组数据
13.48-20.74=-7.26
然后对（-7.26）取2的负对数，得：153.27
这个就是你的相对表达量
呵呵，还有就是，你用的啥软件，还这样自己手动算么？？？ 2-ΔΔct& & 实验组目的基因的Ct值减去内参基因-对照组目的基因的Ct值减去内参基因 dCt1&&=对照目的-对照内参
dCt2 =实验目的-实验内参
ddCt= dCt1-dCt2，
fold change= 2 exp（ddCt） 可以在excel 中输入公式计算
2-ΔΔct， 按照此公式计算要求你的对照组中要有内参，18s， GAPDH， beta-actin 等基因的表达
这样才能够用相对表达量计算
希望有帮助 : Originally posted by mamadexiao at
你先用你的实验组的每一个样的目的基因的Ct值减去内参基因的
将上述的结果取2的负对数
举个例子说，你的第一组数据
13.48-20.74=-7.26
然后对（-7.26）取2的负对数，得：153.27
这个就是你的相对表达量
呵呵， ... 请问，看2-detadetaCT差异是否统计学意义，这P值是统计哪几个数据？
var cpro_id = 'u1216994';
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求助,我的RNA为什么总是有降解？急！
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这个帖子发布于9年零270天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我做的是RT-PCR,要进行半定量.可提取的RNA总是有降解,我的TRIZOL是新定的,是INTROVIGON的,材料也是按要求在DEPC水中泡了4-5天,其间摇动了2-3次,开始提的几个标本虽有些降解,但还能做出来,最近几个标本降解更厉害了,我操作已很小心了,我实验室还有一个同门也是,在他认为自己的操作没有问题时,提出的也降解了,从他那次降解后我连做两次也都降解了,请各位高手帮忙分析一下,原因何在,下一步我该怎么办
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你提的是什么材料的，以我的经验提取RNA降解主要原因还是内源RNA酶起作用，所以在匀浆样品时一定要小心，如果用液氮研磨一定 要边研边加液氮
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谢谢你,我是提骨髓单个核细胞.
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俺知识有限小声说几句：材料也是按要求在DEPC水中泡了4-5天,其间摇动了2-3次DEPC具有较强挥发性，不能使用长久，最多两次，一次最好，放置长久RNA酶抑制作用难以肯定，且增加污染机会。请指正！
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重新用DEPC处理所用的TUBE和TIP，或用进口的RNase free的TUBE、TIP。全部过程注意无菌、消毒，包括枪。
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我的感觉是RNA不那么容易降解，你是不是考虑一下你的操作，譬如在抽提时你的上清是多少，我的经验是这步对量的影响很大！
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谢谢,我已换了无酶的材料,上清这次取200左右,好多了,但任有些拖尾.还能帮我分析分析吗
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你的组织量是多少？我一般用的100mg,上清可以有700ul,我作过对比，RNA在靠近蛋白层要聚的多，尤其是你的RNA本身就少时，损失一部分的上清可能就丢了大部分的RNA，我建议你上清量大点，或者是也作个比较。
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这个帖子发布于9年零270天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我做的是RT-PCR,要进行半定量.可提取的RNA总是有降解,我的TRIZOL是新定的,是INTROVIGON的,材料也是按要求在DEPC水中泡了4-5天,其间摇动了2-3次,开始提的几个标本虽有些降解,但还能做出来,最近几个标本降解更厉害了,我操作已很小心了,我实验室还有一个同门也是,在他认为自己的操作没有问题时,提出的也降解了,从他那次降解后我连做两次也都降解了,请各位高手帮忙分析一下,原因何在,下一步我该怎么办
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材料是要立即冻在液氮里的
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标本如果不是马上放入-70度的超低温冰箱内，应马上转换为cDNA，因为环境中存在大量RNase.
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我的RNA是马上跑的胶就显示有降解.因为前段时间遇到上述情况,我干脆定了无酶的TIP头和EP管,并从新定了录仿,异丙醇和无水乙醇,DEPC水.今天我又提了一个标本,整个操作我觉得还好,异丙醇沉淀后有白色絮状物,可我测OD值时260NM280NM吸光均为负值所以浓度也是负的,我于是仔细看了看,发现好象还有东东没溶,我就吸打助溶,待似乎已溶了后我再测任然是负的,只是负的少些了,我不死心,继续跑胶,结果有拖尾,有两条带,第一条十分的粗,约是第二条的5-10倍,我十分不解,这到底是哪出问题了,我提的是骨髓单个核细胞,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,先冻到TRIZOL里再提,我师兄师姐以前也是这么做的也挺好的,各位高手快救救我,我快被焦虑死了.
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应该是有蛋白污染，而且叫多，我也有类似经历，建议1：氯仿抽屉后，用酚氯仿异丙醇（25：24：1）反复抽屉2-3次2：将0.5ml异丙醇改为0.25ml异丙醇和0.25ml沉淀液（见《分子克龙》RNA提取方案2）我试过，沉淀量明显减少，且条带的smear减少。 如果我的建议有效，请跟贴！！
精神心理科
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出现负值的可能是你的比色杯沾有灰尘。
关于丁香园503 Service Temporarily Unavailable
503 Service Temporarily Unavailable
nginx/1.4.1帮忙看看这张图的RNA可否做荧光定量？ - 分子生物 - 小木虫 - 学术 科研 第一站
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帮忙看看这张图的RNA可否做荧光定量？
细菌，革兰氏阳性：
可以做，但是结果是不可信的 : Originally posted by yhbletter at
可以做，但是结果是不可信的 为什么可以做 但是结果又不可信啊？ 你的RNA降解了，但是仍然可以逆转录成cDNA，因此做qPCR是有结果的（通常qPCR扩增的产物长度很短100bp左右），不准确是因为降解后逆转录得来的cDNA不能真实反映本身的mRNA的量。你后续会做western吗 : Originally posted by yhbletter at
你的RNA降解了，但是仍然可以逆转录成cDNA，因此做qPCR是有结果的（通常qPCR扩增的产物长度很短100bp左右），不准确是因为降解后逆转录得来的cDNA不能真实反映本身的mRNA的量。你后续会做western吗 不做western 降解比较严重。如果不是电泳的问题，可能是样品不好，做荧光定量不准确。 : Originally posted by cicelyzh at
降解比较严重。如果不是电泳的问题，可能是样品不好，做荧光定量不准确。 支持 算了吧，质量这么差，怎么做？做出来的结果能用吗？
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