大肠杆菌培养条件在40℃气浴条件下培养了16小时,会失活么?

KGF-2基因克隆及在大肠杆菌中的表达_百度文库
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KGF-2基因克隆及在大肠杆菌中的表达
K​G​F​-基​因​克​隆​及​在​大​肠​杆​菌​中​的​表​达
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简析天蚕素A蛙皮素杂合肽及其突变体在大肠杆菌中的融合表达.pdf69页
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硕士学位论文
天蚕素A-蛙皮素杂合肽及其突变体在大肠杆菌中的融合表达
姓名:冯惟萍
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:韩跃武
座机电话号码
兰州大学硕:L学位论文
天蚕素A.蛙皮素杂合肽及其突变体
在大肠杆菌中的融和表达
目的:优化设计CA-MA杂合肽基因,寻找合适的突变位点,利用PCR
分别在大肠杆菌中融合表达,进行初步的纯化,为进一步研究CA.MA结构与功
能的关系奠定基础。
DNA序列及氨基酸残基序列,按照
方法:根据Genebank中CA-MA
Codon Database中大肠杆菌偏爱密码子原则对CA-MA基因进行优化设
计。利用基因重组技术构建克隆重组体pUC.18.CA.MA,转化至大肠杆菌DH5a
中,经a互补筛选,挑出阳性菌落,抽提重组质粒鉴定后测序;构建表达重组体
pGEX.41二1.CA.MA,转化大肠杆菌BL21,经筛选后挑取菌落,抽提重组质粒鉴
定后测序。根据CA-MA结构,寻找合适的突变位点,设计突变引物,利用反
MutantBEST
转PCR定点突变技术,.采用TaKaRa
Kit对重组体
变体转化至大肠杆菌BL21‘中,挑出阳性菌落,抽提重组质粒鉴定后测序。将两
种阳性的重组转化菌落用IPTG37" 2诱导表达,SDS.
GST.W16-CA.MA融合蛋白。
1、获得优化的CA-MA
DNA片段,大小为
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在大肠杆菌中表达重组cota蛋白的培养条件优化
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