57用富含DHA的裂殖壶菌对轮虫进行营养强化的研究_宋晓金
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57用富含DHA的裂殖壶菌对轮虫进行营养强化的研究_宋晓金
用富含DHA的裂殖壶菌对轮虫进行营养强化的研究；宋晓金1,张学成1,朱路英1,李荻尔2；(1.中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛2660；摘要:裂殖壶菌(Schizochytriumli；limanium)；中图分类号:S963.21文献标识码:A文章编号；裂殖壶菌(Schizochytriumliman；中的卵囊菌纲(Oomycetes),破囊壶菌属(；繁
用富含DHA的裂殖壶菌对轮虫进行营养强化的研究宋晓金1,张学成1,朱路英1,李荻尔2(1.中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛.青岛森淼实业有限公司,山东青岛266101)摘要:裂殖壶菌(Schizochytriumlimanium)DHA,本实验用裂殖壶菌对褶皱臂尾轮虫(Brachionus。:3虫体内的DHA/FA值和DHA,DFA5.98%、10.21%和13.44%,轮虫体内的mg/g,并于12h后达到最大值,超过12hHAFA值开始下降。对照组在实验过程中均未检出,如轮虫密度也显著高于对照组,并且实验组的怀卵率分别34.5%和53.7%,而对照组仅为20.1%。关键词:营养强化;DHA;褶皱臂尾轮虫(Brachionusplicatilis);裂殖壶菌(Schizochytriumlimanium)中图分类号:S963.21　　　　文献标识码:A　　文章编号:07)　　裂殖壶菌(Schizochytriumlimanium)属于真菌中的卵囊菌纲(Oomycetes),破囊壶菌属(Thraus2μm,无性tochytrium)。营养体为单细胞,直径7～15繁殖由孢子囊产生游动孢子,游动孢子具等长的双鞭毛。裂殖壶菌是1996年日本学者Honda等[1,2]从西太平洋红树林地区分离到的,1998年Onal等用裂养不良,生长停滞,严重的可导致死亡。这种现象在海水鱼类中尤为严重,尤其是仔稚鱼阶段。如果海水仔鱼饲料中缺乏DHA,将导致仔鱼神经系统的发育不良,还直接影响细胞膜的色素沉着。如果在仔鱼的开口饲料中提供充足的DHA,可提高仔鱼对环境变化的忍耐力,影响发育中鱼大脑的质量和脂肪酸组[8,9]。因此,在水产养殖殖壶菌干粉喂养贝类,对其生长有明显的促进作用。成,从而提高仔鱼的存活率过程中适量投放富含DHA的生物饵料是增产增收2000年Davis等用裂殖壶菌干粉作为饵料添加剂喂养牡蛎幼体,结果其生长速度比未加此添加剂的增加3.2%,增产效果明显;利用裂殖壶菌干粉作为饵料添加剂可满足受精卵发育期对多不饱和脂肪酸的需求。2001年Hammond等[3]对从裂殖壶菌中提取的DHA进行了药理学及毒理学方面的研究,用裂殖壶菌制备的干粉作为食品添加剂,喂养小鼠、兔子,均未见有任何毒副作用。褶皱臂尾轮虫(Brachionusplicatilis)是一种海洋轮虫,作为苗种生产的前期生物饵料已被广泛使的一个重要手段,国内外开发出了许多营养强化剂,如日本等国的乳化乌贼肝油、油脂酵母,比利时INVE公司的SuperSelco,美国、挪威等的粉末油脂,还有国内研制的50DE微囊DHA营养强化饵料[10～12]。目前国内关于裂殖壶菌的研究报告不多,也未进行应用开发,只有几篇关于裂殖壶菌的综述和一份提交到Genbank的18SrRNA的基因序列,尚未发现用裂殖壶菌强化轮虫的报道。本研究采用裂殖壶菌对用,轮虫自身所含的营养对水产动物苗种的成活率、轮虫进行营养强化,并用强化后的轮虫对幼鱼进行投喂实验。生长速率及抗逆、抗病能力有很大影响[4～7]。中国应用酵母培养轮虫的较多,这种轮虫因缺乏脂溶性维生素及n23多价不饱和脂肪酸,在用作前期生物饵料时会造成苗种的营养不良。n23系列多不饱和脂肪酸(n23PUFA)是海水稚鱼维持正常生长所必需的,研究结果表明,n23PUFA中的DHA对稚鱼的生长发育起着决定性的作用。当缺乏DHA时,会引起营收稿日期:;修回日期:基金项目:青岛市科技发展计划项目(0)作者简介:宋晓金(19802),男,河北唐山人,硕士研究生,E2mail:;张学成,通讯作者,E2mail:xc2zhang@43MarineSciences/Vol.31,No.12/20071　材料与方法1.1　材料1.1.1　裂殖壶菌2　结果2.1　各实验组观察检测结果轮虫强化实验分为A,B,C,D4个组,其中A为对照组,只添加绿球藻,细胞密度约850万个/mL,B,C,D3组为实验组,强化时添加绿球藻和裂殖壶菌,裂殖壶菌由中国海洋大学生命学院微藻生物技术实验室提供。1.1.2　轮虫绿球藻细胞密度约850,各个实验组,177个/mL;怀卵率%,9.7%,9.2%。轮虫游动和摄。强化后轮虫密度、怀卵率及活力情况如图1和图2。从图1和图2可以看出,经过一段时间的适应后(约3h),对照组轮虫的活力及摄食情况仅稍有加褶皱臂尾轮虫由中国海洋大学生命学院微藻生物技术实验室提供。1.2　方法1.2.1　实验于6究所麦岛渔业科学试验基地进行。轮虫培养于2m3玻璃钢水槽中,每个玻璃钢水槽中的水体为1m3,水温为25℃,绿球藻细胞密度为850万个/mL,充分通气[13～15]。实验分为A,B,C,D4个组,A组为对照组,只添加绿球藻,B,C,D组为实验组,分别加入质量浓度为20,50,80mg/L的裂殖壶菌,其他条件各组均一致,于3,6,9,12,18h在解剖镜下观察检测轮虫的摄食、活力、密度、怀卵率等指标的情况,并用300目筛绢收集轮虫样品速冻、待测。1.2.2　样品甲酯化方法强,而实验组轮虫的活力和摄食状况明显加强,均呈活跃状态。实验结束时,实验组中各项指标均显著高于对照组。对照组A的轮虫密度由171个/mL上升到220个/mL,增长率为28.7%;B组轮虫密度由最初的198个/mL上升到292个/mL,增长率为47.5%;C组最终密度为397个/mL,D组为412个/mL,增长幅度分别高达145%和132%,呈现爆炸式增长;各实验组的怀卵率分别为32.6%,46.5%和53.7%,均明显高于对照组的25.3%。通过对实验各组轮虫密度、怀卵率、活力和摄食情况的观察,说明裂殖壶菌对轮虫的生长和繁殖均有良好的促进作用。称量冷冻干燥的轮虫干粉20mg、内标2mg加入试管内,加入5mL饱和KOH2CH3OH溶液,超声波破碎4min之后60℃水浴30min,再加入5mL饱和BF32CH3OH溶液60℃水浴30min。水浴后向试管中加入5mL正己烷萃取,取上层清液保存待用。1.2.3　DHA的测定采用天美GC7890Ⅱ气相色谱仪,脂肪酸柱为3mm×2m,载气为高纯氮,设定程序升温为170～230℃,170℃保持1min,然后每分钟升温15℃至230℃,230℃保持23min,氢火焰检测器温度为260℃。恒流控制,氮气流量为30mL/min,氢气流量为30mL/min,空气流量为400mL/min。进样量为μ1L。使用内标法计算DHA在轮虫体内的含量及在总脂肪酸中的比例。44图1　实验各组轮虫密度的变化Fig.1　Variationofrotiferdensityineverytestinggroup海洋科学/2007年/第31卷/第12期2.2　实验各组轮虫体内DHA积累情况将样品甲酯化后进行高压气相色谱分析,采用内标法,将内标直接加到溶液中,连同菌粉样品一起经历预处理全过程。这样,即使在预处理过程中试样部分损失或甲酯化反应中脂肪酸甲酯的转化率达不到100%也不影响定量结果。,试样本身不含]。海洋微藻中正十九酸含,因此本方法选择正十九酸作内标。计算DHA的含量,并计算出轮虫体内的DHA/FA值和DHA的净含量,结果见表1。图2实验各组轮虫怀卵率的变化Fig.2　Variationofegg2hangingrateofrotiferineverytes2tinggroup表1　实验各组轮虫体内DHA的积累测定结果Tab.1　DeterminationofDHAinrotiferbodyDHA(mg/g)DHA/FA(%)组别ABCD注:―表示未检出　初始　　3h　　6h　　9h　　12h　　18h　000000.673.53.501.385.045.3104.016.516.8704.427.858.1403.995.455.73　初始　　3h　　6h　　9h　　12h　　18h　-----2.472.613.53-3.864.867.54-4.738.4310.02-5.-5.　　从表1可知,裂殖壶菌对增加轮虫体内的DHA含量有显著作用。3个实验组B,C,D在强化12h后轮虫体内DHA/FA的比值分别为5.98%,10.21%和13.44%,干燥轮虫粉中DHA的质量比分别为4.42,7.85,8.14mg/g。在超过12h后,轮虫体内的DHA含量显著下降,因此,使轮虫体内积累高DHA含量的时间以12h为宜。对照组A在整个实验过程中均未检测出轮虫体内的DHA含量。在,能够满足工业化的连续生产。实验组B中由于裂殖壶菌的含量较低仅为20mg/L,故B组轮虫的增长速率和轮虫的怀卵率都不高,强化效果不佳。此外,由于裂殖壶菌有自然沉降作用,在强化实验时实验各组必须充分通气,保证裂殖壶菌悬浮在实验水体中,保证强化效果。3.2　轮虫作为DHA的营养载体比较强化试验结果不难看出,在质量浓度分别为50mg/L和80mg/L的裂殖壶菌饵料强化组中,轮3　讨论虫的强化效果十分明显。实验开始时各组均未有3.1　裂殖壶菌对轮虫生长率的影响DHA检出,强化12h后,C组轮虫体内DHA质量比达到了7.85mg/g,D组达到了8.14mg/g,DHA含实验结束时,对照组A轮虫密度为220个/mL,量增加显著,两组之间的DHA含量差异是由于裂殖增长了28.7%,实验组B轮虫密度为292个/mL,增壶菌的添加量不同所造成的。12h后实验B组轮虫长47.5%,而实验组C,D轮虫密度分别增长了145%和132%,达到了397个/mL和412个/mL。体内DHA质量比为4.42mg/g,与C,D两组的结果这是因为在C,D两组中,饵料营养丰富,环境条件适相差较大,这可能是由于该组裂殖壶菌的添加量过低宜,在经过几个小时适应后,摄食活动加强,轮虫密度而造成的强化效果不佳,这和裂殖壶菌影响轮虫生长和繁殖的观察结果相一致。对照组则明显不同,实验迅速增加。另外,C,D两组轮虫的怀卵率也很高,分别为46.5%和53.7%,保证种群能够持续稳定地存18h内均未见有DHA检出,因而,仅用绿球藻营养MarineSciences/Vol.31,No.12/200745强化轮虫是不妥的。研究表明轮虫体内的DHA含量的多少,对大菱鲆、牙鲆等经济鱼种育苗时的成活率、白化率有很大影响。综合两组实验结果可知,用裂殖壶菌强化轮虫能明显促进轮虫的生长和发育,并显著提高轮虫体内的DHA含量。致谢:黄海水产研究所麦岛渔业科学试验基地在本实验中给予大力协助,特此致谢。参考文献:[1]　YokochiT,HondaD,HigashiharaT,etal.Optimi2zationofdocosahexaenoicacidproductionSchizochytriumlimacinumSR21biologyand,(2[2]　Yaguchi.ofacidbySchizochy2triumsp.SR21[J].JournaloftheAmericanOil水产,41.[7]　熊坂清弘.“海洋酵母”和EPA?DHA强化饲料[J].养殖(日),):]　张利民,常建波,张秀珍,等.50DE微囊营养强化轮虫DHA的研究[J].中国水产科学,):44249.[9]　张利民,常建波,张秀珍,等.n23多价不饱和脂肪酸营养强化轮虫技术研究[J].水产学报,):]　.[J].齐鲁渔业,13(5[11],,,13(1):19221.X,WangW,WuJM,etal.Effectsofdi2etarylipidsourcesonfattyacidcompositionofrotiferBrachionusplicatilis[J].JournalOfFisherySciencesOfChina,):52257.[13]　陈德富,邱其樱.冷冻酵母培养S型褶皱臂尾轮虫的效果[J].福建水产,):30232.[14]　张道南.利用啤酒酵母活菌株培养褶皱臂尾轮虫的研究[J].水产学报,):30232.[15]　王,梁亚全.褶皱臂尾轮虫繁殖和培养的研究[J].海洋水产研究,48.[16]　沈小婉.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利用微藻营养强化时褶皱臂尾轮虫的摄食和脂肪酸组成研究
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轮虫与卤虫在营养价值等方面的比较
摘　要：近些年来，随着水产养殖业的发展，轮虫（rotifer）和卤虫（Artemia）由于适口性好、蛋白含量高、对水质污染小等优点，已被广泛地应用于鱼、虾、蟹类的苗种生产，成为不可替代的生物饵料。本文对轮虫和卤虫的生物学特性、研究历史、营养价值、培养方式和营养强化等方面进行了比较性的综述，以便对轮虫与卤虫有进一步的了解。