影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
喜欢此文档的还喜欢
影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素
影​响​琼​脂​糖​凝​胶​电​泳​条​带​扭​曲​程​度​的​因​素
阅读已结束，如果下载本文需要使用
想免费下载本文？
把文档贴到Blog、BBS或个人站等：
普通尺寸(450*500pix)
较大尺寸(630*500pix)
你可能喜欢电泳条带的光密度分析原理_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
&&¥2.00
&&¥2.00
&&¥2.00
&&¥2.00
&&¥2.00
&&¥2.00
喜欢此文档的还喜欢
电泳条带的光密度分析原理
阅读已结束，如果下载本文需要使用
想免费下载本文？
把文档贴到Blog、BBS或个人站等：
普通尺寸(450*500pix)
较大尺寸(630*500pix)
你可能喜欢帮忙看看我的电泳图，为何每次跑marker都会少一条带
13:46:53&&&来源：&&&评论：&&
帮忙看看我的电泳图，为何每次跑marker都会少一条带这是我刚跑的SDS-PAGE，用的是BIO RAD 的电泳系统，10%的分离娇，5%的浓缩胶，可连续跑了好多次，marker都只有5条带，而实际应该有6条的。marker：14.5、21、31、43、67、94kd。不知道是少了那条，请大家帮我看看，因为急需确定我的目标蛋白的分子量。
关键词:[条带 电泳图 分子量 电泳]…
这是我刚跑的SDS-PAGE，用的是BIO RAD 的电泳系统，10%的分离娇，5%的浓缩胶，可连续跑了好多次，marker都只有5条带，而实际应该有6条的。marker：14.5、21、31、43、67、94kd。不知道是少了那条，请大家帮我看看，因为急需确定我的目标蛋白的分子量。
左边是marker，中间是我的目标蛋白，上面那条横线是溴酚蓝的
我也有这种现象正打算重新买Marker，我怀疑供货商给错了楼主是用中科院的marker吗？
楼主买marker时对方没有给你说明书吗?那上面应该有该Marker的示意图，你照着那个图谱对着看看就可以了，因为个条带之间的距离不是等大的，按照一定比例可以判断的。不过还是建议你换支Marker，不贵
建议楼主用12%或更高浓度的胶试试！
我也遇到过这种现象，从条带的距离看，我觉得少了94KD的那条，其实仔细看上面隐隐约约有一条细细的带，位置是94KD的位置，不知你表达的蛋白是多大的？你可以用蛋白大小表达明确的做个对照
你的电泳图是不是放反了，也就是说电泳方向是由下到上的?我看是你的胶浓度偏小了，最前面（图中最上方）的两条带跑到一起了。有个建议你看看：把胶浓度加大跑跑看；另外，想知道你的30％丙稀酰胺是怎么配的，是不是加29克丙烯酰胺加1克甲叉丙稀酰胺充分溶解后 再定容到100ml的？我实验室有个同学，当时配30％丙稀酰胺时候29克丙烯酰胺加1克甲叉丙稀酰胺再加100ml水，结果这时候丙稀酰胺的浓度就已经偏低了 后来跑15的胶像10％的胶跑出来的。
我跑胶时出现过楼主的情况，最后两条MARKER堆积在一起（你附图的上部14.4和20.1的两条带），我当时是为了方便，将分离胶除了催化剂外的成分预先混合，置4度冰箱备用的，配置时间长了以后，跑的带型就是楼主胶的样子（不管是10％或者15％的胶都不能将最后两条MARKER分开，其实10％的胶也能将低分子量MARKER的六条带分开），后来重新配置了分离胶后就没有这种情况了。我认为关键是分离胶的配置，要新鲜，分离胶缓冲液的pH值很重要，你可以试试！祝你实验顺利！
请问pinghw兄，哪些药剂不能预先混合我一般将分离胶缓冲液和10%SDS混合，这样会出问题吗？我以前也是这样做，没有出问题。但是现在就出现了楼主的问题？请问是什么原因？谢谢
请问pinghw兄，哪些药剂不能预先混合我一般将分离胶缓冲液和10%SDS混合，这样会出问题吗？我以前也是这样做，没有出问题。但是现在就出现了楼主的问题？请问是什么原因？谢谢其实分离胶和浓缩胶中除了催化剂以外的成分都可以预先混合的，我们一直都这么用，因为我做的蛋白分子量在21KD以上，所以即使下面的条带没完全分开也不影响观察，但如果要留照片备用时，我会不用预先混合的分离胶及浓缩胶，各成分全部用新鲜配置的，这样跑出来的效果非常好。我建议你校正一下分离胶缓冲液和10％SDS混合液的pH值，因为Tris-HCl放置一段时间后pH值会发生变化而影响分离效果，仍没有改观只有重新配置液体了。不过10％SDS不用重配啦，只要你确信浓度没弄错，配置后用一年以上也没有问题的。
pinghw :thank you
谢谢各位的热心指点！我觉得propeg兄和pinghw兄的说法很有道理，可能是14.5的和21的两条带重了，我打算重新配缓冲液，并加大胶的浓度试试。
我认为是少了14.5的带子
溴酚蓝是20KD的
所以最上边一条是21KD 。
14.5的已经跑没了
你应该在胶跑到一半时看一下溴酚蓝前是否有条带子
我也是老出现这种状况，每次我自己配的溶液跑出来的胶都是少一条mark，溶液反复配了很多遍都是如此，pH值也认真的调了，可结果就是不行，换了别人的溶液就好了，不知道自己配溶液怎么回事了，郁闷的不得了，顺便说一句，这肯定不是你的mark质量有问题，问题在你配的溶液上，希望大家共同研究一下是什么原因造成的。
10%胶是看不到14.5Kd条带的，早就跑出去了。
10％的胶跑出来这个marker就是这个样子的，14.5的和21的没有拉开，如果你想跑得好看一点，用12％的胶marker就可以跑开了
我们也经常出现这种情况，你的胶放反了，而且你应该重新更换Tris缓冲液，校准Ph值，这样你胶的上方那条蓝色的溴酚蓝线就会消失了。Marker少一条带的现象我也碰到过，我认为是还原性的上样Buffer配制有问题，跑出来的Marker少一条带。
用12%的分离胶，或者再高一些15%，maker会很好看的。而且，修芬兰不能离胶下缘太近了，15mm左右吧。
我认为是少了14.5的带子 溴酚蓝是20KD的 所以最上边一条是21KD 。 14.5的已经跑没了 你应该在胶跑到一半时看一下溴酚蓝前是否有条带子如果溴酚蓝的分子量比marker的14.5kda的带子还大，那么别人为什么会把这条带留在胶里而不是跑出去？
我认为pinghw朋友说的对。根据我跑了n年胶的经验来看，14kd和20kd的maker和溴酚兰都重叠在一起了，溴酚兰都没跑出胶，14的marker怎么可能跑出去？还有就是分离胶和浓缩胶成分预先混合的问题，分离胶成分是不能预先混合的，因为分离胶的pH太高，而丙稀酰胺对碱和光都敏感，碱性环境下时间长了会变成丙稀酸。浓缩胶可以预先混合，因为pH低
谢谢各位！我今天试了试12%的胶，跑出了六条带，很清晰，看来的确是胶的浓度太低。
我前天也用10%的胶跑过，以前没有注意，这回好好看了一下，17kda的蛋白跑得和溴酚兰基本重叠在了一起，10%的胶确实小了点：）
凝胶的浓度与其的分辨率密切相关，在进行蛋白质电泳前如果预知目的蛋白的分子量，那么可以根据凝胶的不同浓度对应的分辨率来选择你需要的胶浓度；如果不知道分子量大小，可以就选用12%的凝胶，因为它在电泳结束后显示蛋白质MW范围比较广，约10kDa-200kDa，并且大部分的marker在这个浓度的凝胶上显示的都比较全面，我试过几个公司的marker，在12%的胶上都显示不错的效果。我原来使用的marker有7个条带，在12%的凝胶上全部显示，而在8%上就只有5个条带，分子量小的两个条带都跑出胶去了，所以楼主的marker是少了14.5kDa，后来的实验也验证了。溴酚兰的指示作用在很大程度上与实际的蛋白质移动速率是不一致的，不是很准确，要根据胶的浓度来定，比较几种不同浓度的胶在相同条件下电泳，就可以得到溴酚兰的指示位置的经验值，这样对以后的实验是有很大帮助的。
15%的胶试试，我就用这个的，marker不错！
这个问题我已经解决了可能是丙烯酰胺贮液变质或胶灌得不够均匀灌胶前先把药品放置使升到室温加完药品把搅拌均匀再加催化剂加以搅拌这样使胶均匀，跑出来就不会缺marker
将本文分享到下面的网站：
相关热词搜索：
[帮忙看看我的电泳图，为何每次跑marker都会少一条带]延伸阅读：
频道总排行
频道本月排行&& 查看话题
小肽电泳低于5KD的小肽看不到条带
本人正在做的小肽是2.5KD,使用的是中科瑞泰生物公司的超低蛋白maker，其中3.5和1.4KD 的条带看不见。不知道是什么原因，求小肽电泳达人指教。
是用Tricine胶跑的吗？普通的SDS胶在那么小的区域分辨率很低，是看不到带的。 什么样的胶？这个和胶关系很大。起码marker要跑出来的。 我以前做过，可以跑出的，用三层胶就可以了。 染色方法?银染? : Originally posted by conanzzz at
染色方法?银染? 可以试试看 我的电泳就是按照这个说明书做的，希望大家帮忙看看有什么可以改进的地方:
超低分子量蛋白质Marker II（1.4-26.6kD）
Ultra Low Molecular Weight Protein Marker II
●产品编号及规格：
RTD6107& &10T（100μl） ● 储存条件：& & -20℃保存，开封后有效期12个月。 ● 产品简介：& &&&本产品包含2种多肽和4种低分子量蛋白质组成，可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。分子量范围为1.4kD-26.6kD，分子量大小为1.4kD，3.5kD，6.5kD，14.2kD，16.9kD，26.6kD。
● 使用说明： 1. 超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂，请仔细参阅说明书后再进行操作。
2. 收到产品后，室温彻底融化混匀后，离心快甩将溶液收集到管底，根据需要适量分装，-20℃贮存，每次使用时取一管使用。
3. 本产品已经含有了样品缓冲液，使用前取一管Marker样品室温彻底融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见6条蛋白带。一般说来，0.75mm×5mm（厚度×宽度）的加样孔上样10μl，其他规格梳子请适当调整上样量。 注：一次热处理后，未用尽样品-20℃保存；下次使用时只要室温完全融化混匀后即可上样，可以不用再加热处理。
4. 制胶：先配制分离胶，聚合后再配制浓缩胶。电泳时，80-100v跑30-60分钟左右，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至150-200v，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要3-4个小时。注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡1.4kD和3.5kD条带。
5. 如果关心较小的多肽（小于5KD），电泳之后可将胶置于固定液中固定30分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如果不固定直接染色，小蛋白会不清楚。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液（目录号：RTD6201），该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，在小肽的染色中有更大的优势，是常规染色液的理想替代品。
6. 当用配方7进行染色时，由于超低分子量多肽极易从凝胶中浸出，因此染色时间不要太长，染色一般要1个小时左右（最多不要超过1.5小时）。& && && && && && && & （背面续：凝胶配方）
● 附：小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
1. 40%PAA（29:1）（配制浓缩胶）& &&&
& &丙稀酰胺& && &&&38.67 g& &&&甲叉双丙稀酰胺&&1.33 g
用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。
贮存：4℃& & & & 2.&&40% PAA（19:1） （配制分离胶）
丙稀酰胺& && & 38 g
甲叉双丙稀酰胺&&2 g
用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。
贮存：4℃& & & & 3. 凝胶缓冲液（配制凝胶用）
Tris碱&&182g
ddH2O& &300ml
1.5 g SDS或15ml 10％ SDS
用HCl调pH值至8.45
用ddH2O定容至500ml
4. 10×阳极缓冲液（下槽缓冲液）
Tris碱& & 121.1g
ddH2O& &400ml
用HCl调pH值至8.9
用ddH2O定容至500ml
注：使用前稀释成1×阳极缓冲液使用。& & & & 5. 10×阴极缓冲液（上槽缓冲液）
Tris碱 121.14 g
Tricine&&179.2 g
用ddH2O溶解，
用HCl调节pH至8.25，定容至1000ml。
注：使用前稀释成1×阴极缓冲液使用& & & & 6. 固定液
5％ 戊二醛溶液
注：此溶液现用现配。
冰醋酸& && && && &100ml
考马斯亮蓝G-250& &0.25g
水& && && && && & 900ml& & & & 8. 脱色液
冰醋酸&&100ml
水& && &900ml
& & & & 9.&&2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml）
1ml&&1M Tris-Cl pH6.8
2.4ml 甘油
0.31g DTT（或者400μl β-巯基乙醇）
2mg 考马斯亮蓝G-250
用灭菌ddH2O定容至10ml
混匀分装-20℃贮存备用
超低分子量蛋白Marker凝胶的配制方法：
（一块0.75mm mini胶用量）
& & & & 分离胶& & & & 浓缩胶
& & & & 18％T, 5%C /6.0 ml& & & & 5％T, 3.3%C/4 ml
40% PAA（19:1）& & & & 2.7 ml& & & & /
40% PAA (29:1)& & & & /& & & & 0.5 ml
凝胶缓冲液& & & & 1.5 ml& & & & 1 ml
乙二醇（电泳级）& & & & 1.8 ml& & & & /
ddH2O& & & & /& & & & 2.5 ml
10％APS& & & & 45 μl& & & & 30 μl
TEMED& & & & 9 μl& & & & 6 μl
超低分子量蛋白Marker 配套试剂
名称& & & & 货号& & & & 规格& & & & 贮存
超低分子量蛋白Marker I（3.3-20.1kD）& & & & RTD6101& & & & 10次（100μl）& & & & -20℃
超低分子量蛋白Marker II（1.4-26.6kD）& & & & RTD6107& & & & 10次（100μl）& & & & -20℃
彩虹预染超低分子量蛋白Marker（1.2-45kD）& & & & RTD6110& & & & 10次 （50μl）& & & & -20℃
40% PAA（19:1）& & & & AC1914& & & & 100ml& & & & 4℃
40% PAA（29:1）& & & & AC2914& & & & 100ml& & & & 4℃
凝胶缓冲液& & & & GB010& & & & 100ml& & & & 4℃
灭菌水& & & & DE005& & & & 100ml& & & & 室温
10% APS& & & & AP020& & & & 5×1ml& & & & -20℃
TEMED& & & & TE040& & & & 10ml& & & & 室温
10×阳极缓冲液& & & & AB080& & & & 100ml& & & & 4℃
10×阴极缓冲液& & & & CB010& & & & 100ml& & & & 4℃
2×Tricine 上样缓冲液& & & & TP050& & & & 5×1ml& & & & -20℃
考马斯亮蓝快速染色液& & & & RTD6201& & & & 500ml& & & & 4℃
乙二醇& & & & EA0582& & & & 25ml& & & & 室温
50%戊二醛& & & & AM155& & & & 50ml& & & & 4℃ 一般的tricine电泳就可以跑出来啊！
跑电泳的时候，最好控制一下电压，尽量慢的进行电泳！ 可能是因为电泳时间过长，低分子量marker最下面的两条带跑出去了。建议你最好在溴酚蓝还有约0.5cm左右停止电泳，然后染色，脱色即可。 有可能是低于5kd的小肽已经跑出去了 可能是因为电泳时间过长，低分子量marker最下面的两条带跑出去了。建议你最好在溴酚蓝还有约0.5cm左右停止电泳，然后染色，脱色即可。 Tricine三层胶(浓缩胶3%左右,夹层胶16.5%,分离胶16.5%),恒流20mA 3-5小时；染时可以先用考染至少染出Marker（最小条带不一定分辨率很高），如果条带没有，可以用水把考兰洗干净了继续银染 供参考，因为18%的胶浓度比较大，感觉4-5H还不够 你可以先试下16.5%的胶，看Marker能不能跑出来；有条件的话最好控制在低温电泳；另外谢谢你的金币~~ 哈哈下回小心莫手滑~~ 能附一张结果图上来吗？有可能是你电泳的时间不够，1.4kD，3.5kD，6.5kD的条带没分开。也有可能是胶浓度不够。根据前面已经显示出来的带，算出电泳迁移率，估算小肽条带所应该在的位置，来判断是否marker已经降解以及胶浓度是否使用。如果证实了marker没有降解，那就增大胶浓度增大电泳时间试试。注意溴酚蓝指示带并不是电泳中跑得最快的带！ 传张图看看
var cpro_id = 'u1216994';
欢迎监督和反馈：本帖内容由
提供，小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。欢迎协助我们监督管理，共同维护互联网健康，如果您对该内容有异议，请立即发邮件到
联系通知管理员，也可以通过QQ周知，我们的QQ号为：8835100
我们保证在1个工作日内给予处理和答复，谢谢您的监督。
小木虫，学术科研第一站，为中国学术科研研究提供免费动力
广告投放请联系QQ： &
违规贴举报删除请联系邮箱： 或者 QQ:8835100
Copyright &
eMuch.net, All Rights Reserved. 小木虫 版权所有