荧光显微镜 - 概述
原理&中文名称：荧光显微镜 英文名称：fluorescence microscope 定义1：为专门设计或附加配备装置的显微镜。 定义2：选择由高压汞灯或类似光源发出的一定波长的激发光，激发细胞中某些被荧光染料标记的物质发射荧光，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。也可进行半定量测定。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。
荧光显微镜 - 与光学显微镜的区别
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：&&&& 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； & & 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； & & 3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。 荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。 　　荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
荧光显微镜 - 工作原理
光源现在多采用200W的超高压汞灯作，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。 　　超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。 　　新型超高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一些时间后，则需要高压启动（约为15000V），启动后，维持工作电压一般为50～60V，工作电流约4A左右。200W超高压汞灯的平均寿命，在每次使用2h的情况下约为200h，开动一次工作时间愈短，则寿命愈短，如开一次只工作20min，则寿命降低50%。因此，使用时尽量减少启动次数。灯泡在使用过程中，其光效是逐渐降低的。灯熄灭后要等待冷却才能重新启动。点燃灯泡后不可立即关闭，以免水银蒸发不完全而损坏电极，一般需要等15min。由于超高压汞灯压力很高，紫外线强烈，因此灯泡必须置灯室中方可点燃，以免伤害眼睛和发生爆炸时造成操作。 　　超高压汞灯（100W或200W）光源的电路和包括变压、镇流、启动几个部分。在灯室上有调节灯泡发光中心的系统，灯泡球部后面安装有镀铝的凹面，前面安装有集光透镜。 　　国产超高压汞灯GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的进口灯泡，平均寿命在200h以上，价格也比较低。 　我国研制的一种简易轻便型高色温溴钨荧光光源装置，体积小，重量轻，功率小，交、直流两用（自带直流电源），易于携带，使用方便，已推广应用。 滤色系统滤色系统是荧光的重要部位，由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号，各厂家名称常不统一。滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字母代表玻璃，数字代表型号特点。如德国产品（Schott）BG12，就是种蓝色玻璃，B是蓝色的第一个字母，G是玻璃的第一个字母；我国产品的名称已统一用拼音字母表示，如相当于BG12的蓝色滤板名为QB24，Q是青色（蓝色）拼音的第一个字母，B是玻璃拼音的第一个字母。不过有的滤板也可以透光分界滤长命名，如K530，就是表示压制滤长530nm以下的光而透过530nm以上的光。还有的厂家的滤板完全以数字命名，如美国Corning厂的NO：5-58，即相当于BG12。 　　1．激发滤板 根据光源和的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。 　　紫外光激发滤板：此滤板可使400nm以下的紫外光透过，阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5，外加一块BG-38，以除去红色尾波。 　　紫外蓝光激发滤板：此滤板可使300～450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3，外加BG-38。 　　紫蓝光激发滤板：它可使350～490nm的光通过。常用型号为QB24（BG12）。 　　最大吸收峰在500nm以上者的荧光素（如罗达明色素）可用蓝绿滤板（如B-7）激发。 　　近年开始采用金属膜干涉滤板，由于针对性强，波长适当，因而激发效果比较玻璃滤更好。如西德Leitz厂的FITC专用KP490滤板和罗达明的S546绿色滤板，均远比玻璃滤板效果好。 　　激发滤板分薄厚两种，一般暗视野选用薄滤板，亮视野荧光显微镜可选用厚一些。基本要求是以获得最明亮的荧光和最好的背景为准。 　　2．压制滤板 压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波长范围的荧光。与激发滤板相对应，常用以下3种压制滤板： 　　&&&&& 紫外光压制滤板：可通过可见光、阻挡光通过。能与UG-1或UG-5组合。常用GG-3K430或GG-6K460。 　　&&&&& 紫蓝光压制滤板：能通过510nm以上波长的光（绿到红），能与BG-12组合。通常用OG-4K510或OG-1K530。 　　&&紫外紫光压制滤板：能通过460nm以上波长的光（蓝到红），可与BG-3组合，常用OG-11K470AK 490，K510。 反光镜的反光层一般是镀铝的，因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少，反射达90%以上，而银的反射只有70%；一般使用平面反光镜。 聚光镜 专为荧光显微镜设计制作的聚光器是用玻璃或其他透紫外光的玻璃制成。分明视野聚光器的暗视野聚光器两种。还有相差荧光聚光器。 　　1．明视野聚光器 在一般荧光显微镜上多用明视野聚光器，它具有聚光力强，使用方便，特别适于低、中倍放大的标本观察。 　　2．暗视野聚光器 暗视野聚光器在荧光显微镜中的应用日益广泛。因为激发光不直接进入物镜，因而除散射光外，激发光也不进入目镜，可以使用薄的激发滤板，增强激发光的强度，压制滤板也可以很薄，因紫外光激发时，可用无色滤板（不透过紫外）而仍然产生黑暗的背景。从而增强了荧光图像的亮度和反衬度，提高了图像的质量，观察舒适，可能发现亮视野难以分辨的细微荧光颗粒。 　　3．相差荧光聚光器 相差聚光器与相差物镜配合使用，可同时进行和荧光联合观察，既能看到荧光图像，又能看到相差图像，有助于荧光的定位准确。一般荧光观察很少需要这种聚光器。 物镜 各种均可应用，但最好用消色差的物镜，因其自体荧光极微且透光性能（波长范围）适合于荧光。由于图像在显微镜视野中的荧光亮度与物镜镜口率的平方成正比，而与其放大倍数成反比，所以为了提高荧光图像的亮度，应使用镜口率大的物镜。尤其在高倍放大 时其影响非常明显。因此对荧光不够强的标本，应使用镜口率大的物镜，配合以尽可能低的目镜（4×,5×，6.3×等）。 目镜在荧光显微镜中多用低倍，如5×和6.3×。过去多用单筒，因为其亮度比双筒目镜高一倍以上，但目前研究型荧光显微镜多用双筒目镜，观察很方便。 落射光装置新型的落射光装置是从光源来的光射到滤镜后，波长短的部分（紫外和紫蓝）由于滤镜上镀膜的性质而反射，当滤镜对向光源呈45。倾斜时，则垂直射向物镜，经物镜射向，使标本受到激发，这时物镜直接起聚光器的作用。同时，滤长长的部分（绿、黄、红等），对滤镜是可透的，因此，不向物镜方向反射，滤镜起了激发滤板作用，由于标本的荧光处在可见光长波区，可透过滤镜而到达目镜观察，荧光图像的亮度随着放大倍数增大而提高，在高放大时比透射光源强。它除具有透射式光源的功能外，更适用于不透明及半透明标本，如厚片、滤膜、菌落、组织培养标本等的直接观察。近年研制的新型荧光显微镜多采用落射光装置，称之为。
荧光显微镜 - 荧光显微镜CCD
简介荧光显微CCD是与荧光显微镜密切相关的数码摄像产品，一方面它可以将荧光显微镜拍摄的显微摄影产品通过usb接口传输到电脑中，便于图像的采集研究，另一方面，通过荧光显微镜CCD我们可以拍摄到比单纯使用荧光显微镜更好的图片。荧光显微镜CCD可以连接荧光显微镜组成显微成像系统。
适用范围一般情况下，单独使用荧光显微镜即可以达到我们想要的成像效果，但在某些情况下，比如说当荧光比较微弱的情况下，仅仅通过荧光显微镜并不能达到理想的拍摄效果，或者我们希望可以将拍摄的荧光图片上传的电脑生面预览，修改甚至发表学术论文，这时候没有荧光显微镜CCD是不能达到要求的。
产品特点荧光显微镜CCD一般具有良好的弱光捕捉能力，能够捕捉到极其微弱的荧光，因此成像能力好，此外，很多荧光生产上搜对此类CCD作了制冷处理，使得此类CCD的噪音大大降低，信噪比得以很大的提高。由于其方便应用效果，此类CCD相机被广泛应用于荧光显微镜
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保存二维码可印刷到宣传品如何用光学显微镜观察不透光的物质 | 创意科技小组 | 果壳网 科技有意思
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如何用光学显微镜（学校里常用的单目显微镜）观察蚂蚁这种不透光而且比较起伏的生物？要盖玻片吗？
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盖了玻片的话起伏不就没了么?
外加光源照在蚂蚁身上
植物细胞生物学博士生
加大光源，如果物体本身还算透明的话，多少还是能看清一点。不过效果不会太好的
其实最好还是改用实物显微镜。不过那个分辨率不怎么样倒是。
的回应：其实最好还是改用实物显微镜。不过那个分辨率不怎么样倒是。这货就是实物展示台么?
土木工程研究生，FRP
难道蚂蚁不是用放大镜就能看清楚的咩= =
C#程序设计师
的回应：难道蚂蚁不是用放大镜就能看清楚的咩= =烧掉-。-
(C)2015果壳网&京ICP备号-2&京公网安备透射电镜（TEM）
主题：【讨论】请问一下柠檬酸铅一般会选择哪种物质染色
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ID：fyrebecca
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发表于： 11:30:43
请问一下柠檬酸铅染色的原理是什么?是选择染含羧酸类的物质吗? 酰胺会被染色吗?如果酰胺类高分子材料, 如何进行染色? 是将超薄片浸到柠檬酸铅的溶液中还是熏啥的?时间多长?有高手了解这种制样条件吗?
12:22:48 Last edit by fyrebecca
天黑请闭眼
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版面做生物染色的不多，有位姓shi的朋友好久不来了。
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ID：fyrebecca
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你知道还有其他相关的论坛可以去问问吗?
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原文由 fyrebecca(fyrebecca) 发表:你知道还有其他相关的论坛可以去问问吗?这里会有人来的，不过你可以到小木虫啊，科学网啥的地方去看看。
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ID：jeffrylee
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楼主用过醋酸双氧铀染色么，我们这边做生物材料的都是用这个染色，也试过钼酸铵染色的，不过还是铀的效果更好。不知道柠檬酸铅的效果如何？
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ID：fyrebecca
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我看到文献中是先用铀染，然后柠檬酸铅染
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先负染，再正染？不太明白.....
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ID：fyrebecca
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这种叫双重染色法,据说在生物中很常用
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ID：monican
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是将超薄片浸到柠檬酸铅的溶液中时间15~30min然后用去CO2水连续冲洗30sec晾干即可
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ID：kutoku
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在生物样品中一般是对超薄切片进行醋酸铀-柠檬酸铅双染色，醋酸铀可以和细胞中的大多数成分结合，主要是提高核酸，核蛋白及结缔组织纤维成分的反差，柠檬酸铅则是能提高细胞膜及其脂类的反差。本人对于高分子材料方面的染色没有接触过所以不能提供意见观察硫酸铅和4PbO*PbSO4*H2O晶体用那种显微镜适合金相显微镜还是电镜显微镜急！！！！！！！_百度作业帮
观察硫酸铅和4PbO*PbSO4*H2O晶体用那种显微镜适合金相显微镜还是电镜显微镜急！！！！！！！
观察硫酸铅和4PbO*PbSO4*H2O晶体用那种显微镜适合金相显微镜还是电镜显微镜急！！！！！！！
这两种显微镜放大倍数不一样，金相显微镜是几百倍，电镜可达几万倍，根据你想观察到的内容选择。快速浏览：
全部产品系列
金相显微镜
体视显微镜
偏光显微镜
生物显微镜
荧光显微镜
暗视场显微镜
比较显微镜
工具显微镜
测量显微镜
材料决定对铅、镉、邻苯二甲酸盐、磁体等物质进行管理
　　近年来材料分析，欧美等发达国家对儿童产品中有害物质含量问题愈发重视，纷纷制定发布了相关的法规卧式，如欧盟的可释放镍含量指令94/27/EC、美国《消费品安全法》等。此次韩国发布的儿童用品有害物质安全标准，综合了欧美等地区的先进技术法案生物学显微镜，在技术指标上并无其他创新共聚焦，但整体提高了该国儿童用品的质量要求，也增加了他国产品进入该国市场的难度。检验检疫专家建议，提高儿童用品的质量是世界各国大势所趋，必须持续地对影响产品质量的问题进行改进载波片，一方面要仔细学习市场国家的法规要求选配，另一方面要重点在原料选用、产品设计上严格控制质量安全，减少产品出口风险。
　　近日，为加强对危险物质的安全管理和保护儿童健康，韩国技术标准局(KATS)发布了关于儿童用品中有害物质的新安全标准，决定对铅、镉、邻苯二甲酸盐、磁体等物质进行管理。
　　该标准适用于根据韩国《质量管理和工业产品安全控制法案》属于安全管理消费品中的儿童用品，意在控制某些有害物质的使用双目显微镜，包括铅、镉、镍、邻苯二甲酸盐(或酯)、磁铁和磁性部件等倒置，安全要求分别为:(1)产品总铅含量小于300ppm(油漆和涂层中小于90ppm)(2)镉含量小于75ppm(3)镍释放量0.5μg/cm2/week(4)邻苯二甲酸酯总量小于0.1%(5)磁铁尺寸应符合小零件测试筒要求材料。该标准将于2011年11月生效细胞染色。
WuHan Branch,ShangHai Optical Instrument NO.6