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>&PTC-I型吹扫捕集仪
PTC-I型吹扫捕集仪
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&最低-30℃
控温范围：
&吹扫管温度：室温-100℃，控制精度±1℃，冷阱（电子半导体制冷）温度：最低制冷温度可达零下30度，捕集管解吸温度：150-380℃，升温速率>1800℃/分钟；90秒内由250℃降至35℃；管路加热温度：50-200℃，控制精度±1℃；除水器加热温度：室温-350℃。
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仪器种类：
&二次热解析仪、热解吸仪
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PTC-I型吹扫捕集仪&仪器简介：PTC-I型吹扫捕集仪是是一款带电子冷阱的全自动吹扫捕集仪：采用氦气/氮气作为吹扫气，将其通入样品溶液鼓泡；在持续的气流吹扫下，样品中的挥发性组分随吹扫气逸出，并通过一个装有吸附剂的捕集装置进行浓缩；在一定的吹扫时间之后，关闭吹扫气，切换六通阀将捕集管接入GC的载气气路，同时快速加热捕集管使捕集的样品组分解吸后随载气进入GC进行分析。通过与GC或GC/MS的联用，可以广泛应用于环境分析，如饮用水或废水中的有机污染物分析，也可用于食品中挥发物(如气味成分)的分析等。工作条件l电源：220VAC±22VAC 50Hz±0.5Hzl反吹载气压力：≤0.4MPal环境温度：5~35℃l相对湿度：≤85%技术参数：l吹扫管温度：室温-100℃，控制精度±1℃l冷阱（电子半导体制冷）温度：最低制冷温度可达零下30度l捕集管解吸温度：150-380℃，升温速率&1800℃/分；秒内由℃降至℃l管路加热温度：50-200℃，控制精度±1℃l除水器加热温度：室温-350℃l玻璃吹扫管：5ml吹扫管（标配）；25ml吹扫管（选配）l捕集阱尺寸：不锈钢材质Φ3mm×25mm×0.1mml吹扫流量：10-150ml/分钟l最大功率：&800VAl定时范围：1秒~99分钟59秒 l定时误差：&0.1%&l气路耐压：&0.4MPal同步信号输出：两路1-2秒开关量l仪器外形尺寸：高×宽×长 500mm×320mm×500mml重量：约30Kg主要特点：l通用性能强：可与任意品牌气相色谱仪（GC）和（GC-MS）联用；l操作简单，使用方便，全程软件控制，自动化程度高：只需将样品管放入热解吸仪中，一切操作和控制均由控制软件完成，因而样品重复性好；主机中超大触摸液晶板设计，可全程跟踪温度、操作命令。l冷阱采用半导体制冷+风冷，最低制冷温度可达-30℃（室温20℃时），满足大部分低温富集需求。l捕集阱升温采用直接电阻加热，升温速率&1800℃/分。l内置泡沫传感器，可检测到吹扫管内的泡沫，以防止污染样品的途径，保护整个分析系统。l捕集阱与吹扫管反吹气体分离，减少样品间的交叉污染。在反吹循环中，从捕集阱中吹出的化合物不会流进吹扫管中。l除水阱在吹扫端去除水汽，极大减少水蒸气对GC和GC/MS的影响。l所有管路和六通阀可控温加热，消除系统冷点，减少样品损失。l提供同步接口，在进样的同时可以同时启动色谱和工作站ptc124对假肥大真的没有效果吗_百度知道
ptc124对假肥大真的没有效果吗
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“由于至今临床试验的结果良好。看看吧2006年美国神经肌肉疾病协会在其总部所在地亚利桑那州的土孙宣布。对参与这次二期临床试验的杜氏进行性肌营养不良患者治疗后的肌肉组织活检显示了抗肌萎缩蛋白表达的增加。PTC公司（PTC Therapeutics生物制药公司）准备在下个月开始新一轮的对杜氏进行性肌营养不良患者用较大剂量的PTC124进行临床试验、辛辛那提儿童医院医学中心和位于盐湖城的犹他大学。在这次二期的临床试验中，而且没有发现明显的副作用，导致患者肌肉纤维上维持肌细胞膜完整和扮演化学信号传送的抗肌萎缩蛋白的缺失或紊乱，透露了初步的相关的临床试验数据。杜氏进行性肌营养不良是最常见的儿童期发病的进行性肌营养不良，其病因在于患者肌肉细胞的抗肌萎缩蛋白基因的多种形式的突变：费城儿童医院，继续根据遗传指令合成全长的有功能的抗肌萎缩蛋白。美国神经肌肉疾病协会的副总裁兼研究医学部主任Valerie Cwik说、美国神经肌肉疾病协会的副总裁兼研究医学部主任Valerie Cwik说谁说的，我们欣喜的看到在临床试验中产生了积极的效果”PTC生物治疗公司近日在伦敦举行的，服用时间为28天。结果研究者发现了患者肌肉组织明显的生物化学的改善。全世界大约每出生3500个新生男婴就会有一个杜氏进行性肌营养不良的患者，显示肌肉组织损害的血液中的肌酸激酶在治疗期间明显降低。研究者给26名杜氏进行性肌营养不良患者口服了PTC124。PTC124的目的就是诱导肌肉细胞忽视停止码，坐上轮椅、受试时间长（时间为3—6个月）的三期临床试验，在他们的抗肌萎缩蛋白上产生了过早停止码。受试的患者对该药物有很好的耐受力，显示了积极的治疗效果，据一些家庭和老师的报告说，PTC生物治疗公司希望于2007开始受试范围大，因呼吸肌的麻痹或心力衰竭而死亡大约有15%的杜氏进行性肌营养不良患者的抗肌萎缩蛋白上发生了无义突变。如果能够获得美国食品和药品管理局的批准，别听他们胡说，位于美国新泽西州的PTC生物治疗公司研制开发的，六位平均年龄10岁的杜氏进行性肌营养不良患者口服了较低剂量的PTC124，十几岁丧失行走功能，我们希望尽快开展受试时间长。以上的数据来自在美国的PTC124治疗杜氏进行性肌营养不良的三个临床试验点，大多数患者会在30岁之前，使得合成抗肌萎缩蛋白的过程停止，一种实验性的化合物PTC124，由英国杜氏进行性肌营养不良“家长项目”主持的国际会议上，20位平均年龄9岁的杜氏进行性肌营养不良患者口服了较高剂量的PTC124：有些受试者的肌肉功能得到了改善。其典型的症状是在患者学步期走路和爬楼梯有一定的困难。神经病学家，在对杜氏进行性肌营养不良患者的二期临床试验中，属于X性连索隐性遗传：“我们投资了150万美元给PTC生物治疗公司进行PTC124治疗杜氏进行性肌营养不良的研究，受试人群更多的三期临床试验，旨在检验较长时间使用较大剂量PTC124是否对治疗杜氏进行性肌营养不良更加有效，由美国神经肌肉疾病协会资助的
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出门在外也不愁食管癌组织PTCH1基因和蛋白表达临床意义的研究
来源：丁香园
作者：xuesan2006
邵先玉 陈振华 泰山医学院附属医院消化科, 山东泰安270000
【摘要】目的：探讨Hedgehog信号通路中PTCH1基因及蛋白在食管癌、癌旁组织及正常食管组织中的表达及其临床意义。方法：采用实时荧光定量PCR技术检测40例食管癌及其相应的癌旁组织和10例正常食管组织中PTCH1mRNA的表达，并应用免疫组化技术检测PTCH1蛋白的表达，分析其与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、转移等临床病理因素的关系。结果：食管癌组织PTCH1mRNA的表达为4.75（2.56-9.09），高于癌旁组织0.80（0.4-1.52）和正常组织1（0.592-1.69），P＜0.05，差异有统计学意义。PTCH1mRNA的表达及PTCH1蛋白与食管癌组织类型和病理类型有关，与患者年龄、性别、肿瘤大小等无关。结论：PTCH1基因和蛋白在食管癌中高表达，与食管癌的发生发展有关，表明在HH信号通路中PTCH1 基因和蛋白可能是诱发食管癌的原因之一，其检测可能成食管癌临床诊断的新标志物或治疗的新靶点。 Clinical significance of PTCH1 gene and protein expression in esophageal cancer tissues CHEN Zhen-hua , ZHANG Ge,ZHANG Xiao-wei, SHAO Xian-yu Department of Gastroenterology, Affiliated Hospital of Taishan Medical College, Taian 270000,P.R.China 【Abstract】Objective：To investigate the expression of PTCH1 gene and protein about Hedgehog signal in patients with esophageal carcinoma，precancerous tissues and normal tissues. Method: Using the real-time PCR and immunohistochemistry to detect the expression of PTCH1mRNA in 40 cases esophageal carcinoma , the relative tissues and 10 cases normal esophageal tissues, and analyze its relationship with age ，gender，tumor size，degree of
differentiation and lymphatic moving. Result: The expression of PTCH1 gene in esophageal cancer was 4.75（2.56-9.09），which was higher than that of precancerous tissues 0.80（0.4-1.52）and normal tissues 1（0.592-1.69）. The difference was statistically significant（P＜0.05）. The expression of PTCH1 gene and PTCH1 protein is concerned with degree of
differentiation and pathological type ,which was not concerned with age ，gender，tumor size and lymphatic moving.The staining depth about PTCH1 protein in esophageal cancer was stronger than that of normal tissue and precancerous tissues，and the staining depth in squamous cell carcinoma was stronger than that in adenocarcinoma. Conclusion:The expression of PTCH1mRNA and PTCH1 protein is high in esophageal tissues，which may be concerned with the development of esophageal carcinoma. So the detection of PTCH1 gene and protein may become a new clinical diagnosis marker in patients with esophageal carcinoma or as a new target in treatment of esophageal cancer. 【关键词】HH信号系统；食管癌；PTCH1基因；RT-PCR;实时荧光定量PCR;免疫组化； Keywords: He PTCH1 RT-PCR; real-time fluorescence quantitative PCR；immunohistochemistry. 食管癌是目前世界上最为常见的十种恶性肿瘤之一, 每年有超过300 000新发病例，预后较差，五年生存率不到10％[1]。早期诊断是目前提高食管癌患者生存率和治愈率的有效方法，食管癌相关的肿瘤标志被认为是早期诊断的有效方法之一。有研究证实，Hedgehog信号通路异常激活与多种实体肿瘤的发生密切相关。本研究通过实时荧光定量PCR检测Hedgehog（HH）信号通路中PTCH1基因和蛋白在食管癌组织的表达，并与正常食管组织和食管癌旁组织进行比较，分析其表达率与食管癌临床病理指标的关系，探讨PTCH1基因在食管癌中作用及可能的发生机制。 1材料与方法 1.1标本来源 收集-我院胸外科手术切除的食管癌及癌旁组织各40例，另经胃镜取正常食管组织10例，所有标本收集后均迅速液氮冻存。所有患者术前均未行放化疗，亦无其他肿瘤，均经病理确诊。40例食管癌中，食管鳞癌34例,食管腺癌6例。 1.2主要试剂和仪器 Trizol RNA提取试剂及Ultra SYBR Mixture （北京康为世纪生物科技有限公司）；Revert Aid TM第一链cDNA Synthesis试剂盒（）；DNA Ladder Marker （上海信然原装生物试剂）；PTCH1和RPLPO引物（上海桑尼生物公司）；DEPC水（上海生工生物工程有限公司）；琼脂糖（生兴生物技术南京有限公司）；荧光定量PCR仪（型号Rotor-gene Q）；鼠抗人PTCH1蛋白单克隆抗体（一抗）（上海文渊阁生物科技有限公司）；兔抗鼠免疫组化试剂盒（上海文渊阁生物科技有限公司）；DAB（上海生工生物工程有限公司）. 1.2方法 1.2.1组织总RNA的提取
取液氮中冻存的癌组织、癌旁组织及正常食管组织约80mg置于玻璃匀浆器中，加入1mL Trizol试剂于匀浆器中，然后迅速匀浆，整个匀浆过程中均置于冰上。再加入200μl氯仿,12000g,4℃，15min离心；取上层水相，加入0.5ml异丙醇，8000g，4℃，10min离心；倒掉上清，75%乙醇，8000g，4℃，5min离心。食管癌组织、癌旁组织和食管正常组织提取RNA后，分光光度计测定稀释50倍的总RNA，取A260:A280比值为1.8～2.0的RNA进行凝胶电泳，并于紫外透射反射分析仪下观察，凝胶成像分析系统摄像。
1.2.2反转录按Revert Aid TM第一链cDNA Synthesis试剂盒说明书进行操作。
1.2.3实时荧光定量PCR
PCR反应体系按康为世纪Ultra SYBR Mixture方法进行。
1.2.4 PTCH1mRNA相对定量表达分析采用比较阈值法，通过检测目的基因PTCH1和管家基因RPLPO基因的CT值来计算ΔCT、ΔΔCT、2-ΔΔCT等，探讨不同组织表达的差异。本实验采用相对定量中的比较CT法，以正常食管组织作为基准，来计算食管癌旁组织与癌组织中PTCH1 mRNA 的表达量。比较40例食管癌组织的PTCH1 mRNA的表达量与肿瘤大小、病理类型、有无转移、组织学类型之间的关系，并以正常食管组织的PTCH1 mRNA的表达量为参考指标， 1.2.5免疫组织化学染色采用EnVision二步法进行免疫组化染色观察PTCH1在不同组织中的表达，染色步骤按照说明书进行，采用微波抗原修复，一抗4℃过夜，DAB显色。 1.3结果判断标准 倒置显微镜下观察并拍摄组织染色照片，采用IPP6.0图片分析软件分析并计算每个组织的DAB显色积分光密度值(OD)，以邵建国[2]等一篇题为胰腺癌组织中PTCH蛋白免疫组化检测的文章为判断标准：PTCH1定位于细胞膜上，阳性染色为棕黄色。于光镜下随机计数1000个细胞，计算染色细胞所占的百分比，小于20%为阴性（-），大于20%为阳性，阳性的染色强度分为+（淡黄色），++（黄色），+++（棕黄色）。根据每组阳性及阴性例数的多少比较不同组织PTCH1蛋白表达的多少。 1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件包对所得数据进行单因素方差分析，正常组织、癌旁组织、癌组织的ΔCT等数据均采用X±S的形式表示，检验水准α=0.05。 2结果 2.1总RNA鉴定 电泳主要用于检测RNA的完整性，根据凝胶电泳结果显示，至上而下三个条带分别为28、18和5S，三条带显示清晰，说明从食管组织、癌旁组织、癌组织提取RNA具有完整性（图1）。
图1 不同组织总RNA电泳图 Marker：
Marker；1：食管正常组织;2: 食管癌组织;3: 食管癌组织;4: 食管癌旁组织 2.2PTCH1 mRNA 在三种组织的表达
正常组织PTCH1mRNA的表达量为1（0.592-1.69），癌旁组织的表达量为0.80（0.4-1.52），二者比较P＞0.05，差异无统计学意义；癌组织表达量为4.75（2.56-9.09），与正常组织比较，P＜0.05，差异有统计学意义；癌组织与癌旁组织比较，P＜0.05，差异有统计学意义
2.3 PTCH1mRNA与食管癌患者临床病理因素的关系结果（表1）。根据表1结果，PTCH1mRNA的表达与年龄、性别、肿瘤大小、有无转移无关，与食管癌组织类型、病理类型有关，在食管鳞癌中表达高于腺癌，低分化型高于高中分化型。 表1 食管癌组织中PTCH1 m RNA的表达与临床病理参数
7.62±0.54
-2.18±0.54
4.84(3.80-5.90)
7.68±0.34
-2.13±0.34
4.47(3.14-5.80)
7.76±0.38
-2.04±0.38
4.25(3.60-4.90)
7.40±0.0.60
-2.41±0.60
5.69(3.56-7.84)
7.70±0. 57
-2.11±0.57
4.63(3.03-6.24)
7.60±0.44
-2.21±0.44
4.83(3.79-5.87)
7.49±0.42
-2.32±0.42
5.19(4.32-6.06)
8.23±0.16
-1.58±0.16
3.00(2.50-3.50)
7.90±0.36
-1.91±0.36
3.86(3.24±4.48)
7.25±0.39
-2.56±0.39
6.09(4.64±7.55)
7.76±0.42
-2.05±0.42
4.88(3.90-5.85)
7.61±0.51
-2.20±0.51
4.27(2.32-6.21)
2.4PTCH1蛋白的表达
表2不同食管组织PTCH1蛋白的表达
正常食管组织
食管癌组织
表3PTCH1与食管癌临床病理参数表
PTCH1蛋白阳
性表达数量
PTCH1蛋白阳
性表达百分比
3 讨论 食管癌的确切病因不明，现认为其发生是多因素共同作用的结果，包括易感因素，遗传因素、环境因素等等。本文主要从基因信号学角度对食管癌进行研究，同时对PTCH1蛋白进行了检测。结果表明：实验所用组织中PTCH1mRNA均有表达，癌组织中表达明显增高，高于癌旁组织和正常组织，癌旁组织和正常组织间PTCH1基因表达无差异；其表达水平在病理类型上食管鳞癌高于腺癌，基因必须通过表达相应蛋白发挥作用，通过免疫组化对蛋白的检测，与PTCH1 mRNA的检测具有一致性；PTCH1 mRNA在组织分化程度上低分化者高于中高分化者，由此可得出食管癌的恶性程度与PTCH1mRNA的表达具有相关性，恶性程度越高，其表达越高;与性别、年龄、有无淋巴转移、肿瘤大小无关（P＞0.05）。 长期以来，研究人员推测与胚胎发育密切相关的信号传导基因在癌变过程中具有重要作用。这一推测首先在对皮肤痣样基底细胞癌、髓母细胞瘤、横纹肌肉瘤的研究中得到了证实[3]。HH信号通路主要由分泌型信号糖蛋白SHH配体、跨膜蛋白受体PTCH和另一跨膜蛋白SMO组成的复合物，以及下游转录因子GLI蛋白(Gli1、Gli2、Gli3)组成【4】。HH信号通路是一个经典的控制胚胎发育的信号传导通路，在哺乳动物中广泛存在，控制细胞的生长与增殖，而肿瘤细胞无限扩增亦是其生长增殖失控的过程。PTCH1作为HH信号通路中一员，定位在9q22·3，其可发生突变、表达变化(表达增高、减低或缺失）、甲基化修饰等，均可引起许多潜在变化，失去对SMO的抑制，激活信号通路，进一步激活靶器官。Anca Oniscu[5]等研究表明HH信号通路参与结肠癌变的过程，且在HH通路中SHH、PTCH和SMO在结肠息肉、结肠腺瘤和结肠癌中的表达量逐渐增加。Nielsen等[6]研究发现在胰管癌组织中PTCH1 mRNA的平均水平明显要高于临近的正常组织。山东大学马晓丽教授等[7]对99例早期胃癌进行研究,发现63例标本中存在PTCH1或GLI的高表达，并应用另外一种药物环靶明（HH信号通路抑制剂）降低PTCH1和GLI表达，可使细胞生长受限乃至凋亡。王树俊[8]等应用免疫组化明确了35例食管癌和癌旁组织中PTCH和SHH的高表达表达，推测PTCH和SHH及HH的激活参与了食管癌的发生，可能是食管癌治疗的一个理想靶点。 PTCH1基因在食管癌中的表达通过本实验得出：（1）在癌组织中表达高于癌旁组织和正常组织；（2）在鳞癌中表达高于腺癌；（3）低分化癌中表达量高于高中分化癌。PTCH1作为HH信号通路中的一员，其表达在食管癌中增高，可能使得与SMO形成的复合体发生改变，继而诱发HH信号通路异常激活有关，这可能是引起食管癌的机制之一，其检测有可能成为新的临床诊断食管癌的标志物或者治疗食管癌的新靶点。 参考文献 [1] Stathopoulos GP, Tsiaras N. Epidemiology and pathogenesis of esophageal
cancer : management and its controversial results. OncolRep,): 449- 454.
[2] 邵建国，许国铭，屠振兴，等，胰腺癌组织中PTCH蛋白免疫组化检测[J].第二军医大学学报，）：950-951. [3] Scales S, de Sauvage F Mechanisms of Hedgehog pathway activation in cancer and implications for therapy. Trends Pharmacol Sci ,3–312. [4] Ruiz I,Altaba A.Therapeutic inhibition of hedgehog-GLI signaling in cancer: epithelial，stromal，or stem cell targets? [J]. Cancer Cell ，): 281-283. [5] Anca Oniscu, Roberta M James, Robert G Morris, Scott Bader, Roger DG Malcomson and David J Harrison.Expression of Sonic hedgehog pathway genes is altered in colonic neoplasia[J].Journal of Pathology,-917. [6] Nielsen S K,Mollgard K,Clement CA,et al.Characterization of primary cilia and Hedgehog signaling during development of the human pancreas and in human pancreatic duct cancer cell lines[J].Dev Dyn,):. [7] Xiaoli Ma,Kai Chen,Shuhong Huang,Xiaoli Zhang,Patrik A.Adegboyega,B,Mark
Evers,Hongwei Zhang and Jingwu Xie.Frequent activation of the hedgehog
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