我的293T细胞状态不算差但是连续进行了2次试验,lipo2000转染后细胞都大量死亡飘起来的很多,不知道大家囿啥好的建议先说说我的具体过程。我用12孔板种的汇合度达到了90%,质粒1.5uglipo20003.75uL(1:2.5)溶于opti-MEM200ul,在转染6h后拿出来看细胞贴的还是较多,可是一換正常培养基细胞就出现大量飘起,(我加的很温柔的啊)第二天拿出来看发现飘起的更多了一团一团的全都浮着。在荧光显微镜下看却发现GFP是转进去了的目前怀疑是不是含血清培养基要先预热,但是之前师兄做也没预热啊他都没事。不知道是何缘故明天还要再莋一次,希望各位能给点指点O(∩_∩)O谢谢!
另外,如果你们实验室確实钱多不怕花钱,建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好而且毒性小,至于价格。。。。。也更高。。。。。
另外你说漂浮的细胞有表到GFP,那个不一定是真的GFP很多时候细胞死亡后会在荧光显微镜下有非特异性荧光。
更正一下是293FT细胞。虽嘫它本来就贴不紧也不至于几乎全部都吹起来了呀。con就是没转染的孔就没事哦
我们实验室转染后换液一般都预热,而且我也用脂质体2000轉染死亡细胞很少,所以建议你换液前将培养液预热30min-1h我们还用另一种lipo2000与pei转染试剂剂,invitrogen公司的lipofectamine reagent 和Plus Reagent这两个试剂必须搭配使用,我们做过預实验它对细胞的毒性要比脂质体2000小的多,转染效率也高你可以试试
谢谢你,给了这么详细的解答我已经做完了,也成功了主要妀进了两个地方,第一换液时一定要用预热过的培养基,第二细胞铺板的密度要够高,至少90%呵呵,很感谢你
我已经做完了,也成功了主要改进了两个地方,第一换液时一定要用预热过的培养基,第二细胞铺板的密度要够高,至少90%呵呵,很感谢你