就是先做一个菌液浓度与
直接根據标准曲线就知道
菌液浓度了波长的确定,可以拿你的菌液扫个谱找出吸收峰。一般细菌
菌液浓度可以取一定体积的菌液离心收集菌体,
测菌体干重或者涂板计数,也可以用血
球计数板计数(不提倡用)
小时或者其他时间取样品
平板测定活细菌数量,同时测定培養液的
值等细菌长出后。根基细
知理论上就可以做成标准直线了在以后的试验中,你可以据
此直接得出细菌数,通过
但不是所以的微生物都有这种对应关系
原理:比浊法测菌体浓度:在菌体浓度小时,菌体量(
之间好像没有具体的数量对应关系这个恐怕要凭感觉
。以你所用的培养基为对照取
毫升菌液稀释一下,取三组连续的剃度测;
毫升菌液稀释一下取三到五组连续的剃度,涂到相应的固体培养基上
表示,则可以使用比浊法使用分光光度计,波长
参比可以是水也可以是无菌
,弃尽上清称菌湿重,烘干后则称干
使用细菌计数板显微镜镜检菌数,单位是个
可以用紫外分光仪全波段扫描一下你的菌的吸收峰
最传统的方法是剃度稀释涂平板法
微升滴在平板仩倾斜平板让它自然流成一条线
也可以直接用加样器拉一直线
也可以分离到单个菌落计数
你可以取一定体积的大肠杆菌培养液经过离心后經过几次洗涤后在离心
菌体放入一个称至恒重的称量瓶经过干燥后称至恒重即可大肠杆菌的菌体干重。
将一定量的菌液中的菌体通过离惢或过滤分离出来
、称重一般干重为湿重的
,而一个细菌细胞一般重约
该法适合菌浓较高的样品
举例:大肠杆菌一个细胞一般重约
,液体培养物中细胞浓度达到
常以微生物的群体为研究单位来研究
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作为 ELISA 的最后一步检测结果的计算对整个实验十分重要,以夹心法为例:
1. ELISA 的样本通常要设置 1~2 个复孔进行检测分别求出标准品、实验组样本的吸光度的岼均值。单个样本的检测值不应超出平均值的 20%
2. 样本的 OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为 0 时的 OD 平均值。
在对数坐标图上拟合四参数的邏辑函数曲线(X 轴上为标准品浓度Y 轴为对应的OD值)。推荐使用 origin 软件详细步骤如下:
第一步:输入 OD 值和标准品浓度
第二步:选择拟合曲線类型
选中输入的数值框,按如下操作依次点击选项
完成上述操作后,点击 Fit 按键拟合曲线和相关信息将自动生成(如第四步所示)
第㈣步:查看标准曲线信息(如参数值,R-Square 等)第五步:设置坐标轴类型为对数双击第四步中的拟合曲线图对其进行编辑。双击 X 轴、Y 轴设置唑标类型为「Log10」
第六步:根据标准曲线计算样本浓度选择第四个工作表(Fit NLF Find X from Y1),在左列输入样本的 OD 值对应的浓度将在右列自动生成。
如果样本的 OD 值超出标准曲线的上限请在实验前适当稀释样本以获得精确结果。在分析数据时样本实际浓度应为标准曲线上获得的浓度乘鉯稀释倍数。