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一种新的大肠埃希菌O157：H7 vero细胞毒素的纯化及特性分析目​的​研​究​出​血​性​大​肠​埃​希​菌​的​v​e​r​o​细​胞​毒​素​。​方​法​通​过​超​声​破​碎​,​硫​酸​铵​沉​淀​及​两​次​离​子​交​换​层​析​,​再​经​过​凝​胶​过​滤​,​最​终​从​大​肠​埃​希​菌​O5：​H 834​菌​株​获​得​了​一​种​新​的​v​e​r​o​细​胞​毒​素​。​对​此​毒​素​进​行​细​胞​毒​性​测​定​和​分​子​量​及​等​电​点​的​测​定​,​并​对​毒​素​的​N​端5​个​氨​基​酸​序​列​进​行​了​检​测​。​结​果​用​凝​较​过​滤​层​析​测​定​纯​化​的​v​e​r​o​细​胞​毒​素​分​子​量​为3​K​D​,​等​电​点​为.,​蛋​白​N​端5​个​氨​基​酸​序​列​为​S​F​E​L​P​A
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同期刊文献VERO细胞和BHK21细胞细胞低血清培养技术
1细胞低培养介绍
1.1 细胞的体外培养
细胞培养是指细胞在体外条件下的存活或生长，是一种应用最为广泛的体外培养技术。由于体外培养技术最初是从培养组织发展而来的，所以动物学和医学上往往用&组织培养&这一术语来泛指一切可以使细胞、组织、器官在适当的培养条件下离体生长的技术。动物组织培养的技术起源于19 世纪所应用的若干胚胎学技术。1885 年W.鲁把鸡胚的神经板在温热的盐水中成功地维持存活了若干天，是首次体外培养的尝试。1907 年美国胚胎学家R.G.哈里森的实验是组织培养真正开始的标志，他把蛙胚神经管的一小片组织移植到蛙的凝结的淋巴液中，这小片组织不但在体外存活了若干星期，还从细胞中长出了轴突，从而解决了关于轴突起源的争论，表明了利用体外存活组织进行实验的可能性。随后，法国生物学家A.卡雷尔把外科无菌技术引进组织培养技术，他从一个鸡胚心脏组织开始，将不断铺出和增殖的细胞系统地传代，在完全没有抗菌素的条件下维持了34 年。随着抗菌素、合成培养液、胰处理技术的发展以及器皿的改进，动物组织培养技术得到了飞速的发展。其间，W.厄尔首创了从单个细胞进行克隆培养的方法，并第一次有意地进行了悬浮培养的尝试；盖伊等于1952 年建立了最早的上皮型的人的连续性细胞系之一即人子宫颈癌细胞系（HeLe细胞系）。作为现代生物技术的核心基础技术，细胞培养技术广泛用于生物技术的各个领域，特别是现代生物医药技术领域，目前，绝大多数的疫苗、、重组基因工程蛋白类药物等生物医药产品的生产均依赖于细胞培养技术。
1.2 在细胞培养中的作用
血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是需要的，因为大多数单独的培养基并不能提供细胞生长所需要的全部营养，如MEM培养基，较为常用的量为8％～10％的比例，而特殊的低血清培养基血清量可降至3％左右，细胞的形态和功能不受影响。用于细胞培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因主要是来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。小牛血清取自出生10～30天的小牛；新牛血清取自出生24 小时之内的新生牛；胎牛血清应取自剖腹产的胎牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的、补体等对细胞有害的成分最少。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。牛血清中含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。血清是非常复杂的混合物，成分多样，有的对细胞生长有促进作用：提供基本营养物质，如、、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质；提供和各种，如胰岛素、肾上腺皮质、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）、成纤维细胞、表皮生长因子、血小板生长因子等；提供结合蛋白，可携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁，在细胞代谢过程中起重要作用；血清能提供促接触和伸展因子，使细胞贴壁免受机械损伤，对培养中的细胞起到某些保护作用；血清中还含有起稳定作用和解毒的因子，能够维持培养基的pH 值并抑制直接或间接的酶解。血清还能够帮助细胞粘附到培养表面，可能通过提供粘附过程涉及的外源糖蛋白起作用。
但是血清的加入也带来了很多问题：血清的成份可能有几百种之多，目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识，这给研究工作带来许多困难； 血清都是批量生产，各批量之间差异很大，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，从而使实验的标准化和连续性受到限制；对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（成纤维细胞）同时抑制另一类细胞生长（表皮细胞）；血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应（如精胺、亚精胺）形成有细胞毒性作用的聚精胺，补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡；血清取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响；大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成生产成本的主要部分之一。
1.3 细胞的低血清培养
在细胞培养过程中，血清浓度常常是可以降低到传统培养特定类型细胞的水平之下的，从而实现细胞的低血清培养。细胞经较低浓度的血清适应传代后，可适应低血清浓度而良好的生长，细胞的生长状态和生长速度没有明显影响。对于细胞的低血清培养技术，国际上在上世纪就有相关方面的研究。在我国，&低血清与无血清细胞培养技术的研究与应用&已被列入&十一五&国家科技支撑计划重点项目&&动物疫苗关键生产技术研究与开发。
与传统的高血清含量的细胞培养相比较，使用低血清进行细胞培养具有明显的优点。在细胞的低血清培养基中，由于不含、动物来源蛋白、以及、酵母水解物，因此保证了细胞培养中原辅料的使用安全性；在细胞培养阶段不需要使用水解乳蛋白，支持低血清培养，可使血清含量可降低到3％～5％，显著降低培养液成本并提高产品质量；在低血清培养状态下，虽然降低了血清的使用量，但细胞更易培养，细胞生长速度快、形态健壮、活力更强。
1.4 BHK21 细胞的低血清培养
BHK21 细胞是幼年叙利亚地鼠肾细胞（Baby Hamster Syrian Kidney ）。1961 年3 月，I.A. Macpherson 和 M.G.P. Stoker 从一日龄叙利亚地鼠肾分离建株，经过84 天连续培养，获得单细胞克隆细胞，即clone 13 或C13。BHK21 细胞广泛用于增殖各种病毒，已成为制备口蹄疫疫苗所需病毒抗原的理想细胞培养系，应用于口蹄疫疫苗生产，之外还可用于生产狂犬疫苗等其它兽用疫苗。BHK21 细胞染色体分布频率是n＝44，为异双倍体细胞系，4 倍体发生率为4％，大多数细胞核型分析为44，XY，-6，-15，6q+，15q+。原始的BHK21 细胞株为成纤维细胞，属于贴壁依赖性细胞，后经无数次传代后细胞可悬浮生长。
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