测定鹅大肠杆菌灭活苗效价的两种简易方法&第二篇&禽病&（十八）
根据致病性大肠杆菌的部分菌株能致死小白鼠和对鸡红细胞凝集作用等特性，试用小白鼠保护试验及对红细胞凝集抑制试验，并以免疫成年鹅作对照进行对比试验，结果表明，接种灭活苗的成年鹅、小白鼠及注射高免血清的小白鼠均能耐过强毒的攻击；而这两种免疫动物的血清对鸡红细胞凝集有抑制作用。三者之间有着一致的关联性。因此，利用小白鼠保护试验或鸡红细胞凝集抑制试验都能测出灭活菌苗的效价和鹅群的免疫水平。这两种方法具有准确、快速、简便及经济等优点。
关于测定各种畜禽大肠杆菌苗的效价及机体的免疫水平,过去多应用本动物作试验。为了探讨一种准确、快速、简便而又经济的检测方法,为鉴定菌苗质量和制定合理免疫程序提供依据,作者根据鹅致病性大肠杆菌的某些致病特性,试图应用小鼠保护试验及鸡红细胞凝集抑制试验进行测定,并以成年鹅作对照,比较三者的相关性,现将初步结果报告如下。
一、菌种：E10、E12、E18、E26、E46及E54等6株大肠杆菌从广东主要养鹅地区的病死鹅中分离。
二、菌苗：为甲醛氢氧化铝灭活苗。
三、高免血清：按常规免疫方法利用兔体制备。
四、鸡红细胞：按常规方法制备。
五、试验动物：小白鼠购自广东省生物药厂,家兔及鸡取自我校畜牧场,成年鹅购自农户。
&&& 方法与结果
一、成年鹅保护试验：
先后以三批大肠杆菌灭活苗（及8601）分别以0.5及1ml免疫成年鹅22只，经10~14天，以4~6株强毒菌的22小时混合肉汤培养物，每只腹腔注射0.5ml,泄殖腔或阴茎浆膜注射0.5ml。结果全部保护，剖检多无病变。对照鹅13只，全部发病，死亡4只,剖检具典型病变。
二、小白鼠兔疫保护试验：
1、菌苗效价测定：以上述三批灭活苗分别以0.05及0.01
ml免疫小白鼠3批，共39只，经8~14天，用上述强毒菌以0.1ml攻击，结果，获得保护；而同批对照小鼠14/15死亡，1只重病后恢复。
2、血清保护试验：取10只小白鼠，分为5组，每组2只。其中3组分别注射经4、8及16倍稀释的兔高免血清0.1
ml/只；另2组分别注射同剂量免疫鹅（成年鹅经注苗1
ml后10天采血）的血清原液及2倍稀释血清。另设对照组4只。经24小时，6组同时注射强毒（同上）0.1
ml/只。结果免疫的5组，10/10保护；对照组3/4死亡，1只重病后康复。
3、免疫力产生时间的测定：将20只小白鼠分成5组，每组4只，每只小鼠接种8601批菌苗0.1
ml，每天注射一组，连注5天。于最后一组免疫后3天，全部用强毒攻击；另以4只小白鼠作对照。结果，免疫的5组20/20获得保护；而对照组3/4死亡，1只重病后耐过。
4、保存期测定：取不同条件下保存的三批菌苗（8401批，日制造，宝温保存；8501批，日制造，4℃保存；8503批，日制造，室温及4℃保存）分别注射4组小白鼠，每组4只，每只0.1
ml。接种后7天，全部以强毒攻击，每只0.1
ml，另以4只小白鼠作对照。结果，8401批的1只于30小时内死亡，其余3只发病后耐过；8503批室温保存组的1只于24小时死亡，其余3只健活；8501批及51;保存组的小白鼠全部保护，对照组3/4死亡，1只重病后康复。
三、鸡红细胞凝集抑制试验
1、菌株的选择和菌液的制备：从6株菌种中选出凝集既快又明显的E54株，以其每ml含菌量约1390亿时凝集反应最清楚。将该菌液分别加入0.01%硫柳汞、0.4%甲醛、0.01%硫柳汞加0.4%甲醛进行灭活和防腐处理，并以生理盐水作对照，观察其血凝反应情况。结果3组菌液的血凝程度均为“#”，其中以加0.01%硫柳汞的菌液比其他两组菌液的血凝作用好。
2、血凝抑制实验：将经灭活及鸡红细胞吸附处理后的正常及高免兔血清，用生理盐水作2倍连续稀释至3倍，用5%鸡红细胞及E54菌液在玻璃平板上作血凝抑制试验，其中血清、菌液及红细胞悬液均为一滴（约0.01ml），同时设对照组。置37&#分钟，记录结果。试验表明，鸡红细胞只与大肠杆菌菌液呈明显的凝集作用，但加入抗大肠杆菌血清后则能抑制这种凝集现象的发生，并初步测知其效价达32倍。
（1）鹅免疫前后血凝对比试验：选6只成年鹅，在免疫前、后进行血凝试验，结果表明，免疫前及对照血清呈明显的凝集反应（#），免疫后的血清则有较强的抑制凝集作用，其抑制价在8’左右，且随着免疫剂量的加大，其效价亦有提高。
（2）小白鼠全血凝集抑制试验：为了减少分离血清的麻烦，加快检测速度，作者用10%构椽酸钠溶液一滴（约0.01ml），加入上述各项试验中的小白鼠全血（剪尾）一滴（约0.01ml），充分混匀加入菌液及5%鸡红细胞悬液各一滴，37℃经5~10分钟观察，结果：①接种4、8和16倍稀释的兔高免血清（效价1：16）的小白鼠的全血，基本上能抑制红细胞凝集；②接种菌苗小白鼠（4只）的全血，能完全抑制鸡红细胞凝集。③接种注苗的成年鹅（2只）血清（1：1：2稀释）的小白鼠全血，能抑制鸡红细胞的凝集。
1、应用三批大肠杆菌灭活苗注射成年鹅22只，经攻毒后全部获得保护，具有良好的免疫效果。
2、以小白鼠代替鹅，用同样灭活苗接种小白鼠39只，攻毒结果97.4%（38/39）获得免疫，对照组93.3%（14/15）死亡,其结果与应用鹅体试验完全一致。
3、以兔高免血清及鹅免疫血清分别注射小白鼠共20只，攻毒结果全部获得保护，对照组3/4死亡。并初步测知鹅的抗体滴度在2倍以上时即能抵抗强毒攻击。
4、应用鸡红细胞凝集抑制试验，可以检测鹅及小白鼠的抗体水平，其抑制价与小白鼠攻毒结果基本一致。
5、血凝抑制试验以一定浓度的大肠杆菌液及5%鸡红细胞，在37℃恒温中反应快而明显。检查时既可使用血清亦可应用全血，后者既省事又省时，不过必须加入10%拘椽酸钠和等量盐酸混合液，才能获得准确的结果。
6、大肠杆菌菌浪用0.4%甲醛、0.01%硫柳汞及既用甲醛灭活又用硫柳汞防腐这3种方法处理后，对细菌凝集红细胞的特性似无明显影响，其中以加入0.01%硫抑汞处理的菌液血凝作用最好，这样既能将菌液灭活保存，以保证公共卫生，延长使用期，又能使菌液标准化和商品化。
7、根据小白鼠保护试验及血凝抑制试验测知，本菌苗在注射后第3天即可产生能抵抗强毒攻击的免疫力。在室温保存280及517天的灭活苗仍有相当的效价，但较在4℃保存的效价有所降低，初步看来保存时间以一年为好。
8、应用血凝抑制试验及小白鼠免疫试验测定大肠杆菌苗的效价，与用鹅测效价的方法基本一致，且准确、快速、简便及经济，值得进一步扩大试验。
＊本文刊于中国畜禽传染病，1988年第1期
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　雏鹅大肠杆菌病本病的病原为埃希氏大肠杆菌，14日龄以内的雏鹅多发，呈败血性传染病，以春夏秋末多发。卫生条件差、潮湿、饲养密度大、通风不良、空气污浊是导致该病传播和流行的主要原因。 &&&&
　　症状雏鹅患病表现精神不振，缩颈，闭目呆立，食欲减少，渴欲增加，松乱无光泽，干爪，排出青白色稀便，肛门周围羽毛被排出的粪便所沾污。特征表现是结膜发炎，眼肿流泪，有的上下眼睑粘连，严重者见头部、眼睑、下颌部水肿，尤以颌部明显，触之有波动，即所谓的小鹅肿头症。 &&&&
　　剖检雏鹅的特征性病变是肿头症，头部、下颌部的皮下组织水肿，坏死，似胶冻样并有多量的黄色液体浸润；眼结膜充出血，眼睑水肿；脑膜充血，个别有出血；肝脏肿大，边缘钝圆；脾脏肿大，质地较脆；肠黏膜充，出血；肺充血，有的气囊混浊；心包膜增厚，心包液增多。 &&&&
　　防治大肠杆菌为条件性致病菌，饲养管理不当，雏鹅舍卫生条件差等均易诱发本病。因此加强饲养管理，改善卫生条件，严格消毒工作等是预防本病的关键；大肠杆菌的血清型较多，用药物治疗时，容易产生耐药性。一旦确诊为大肠杆菌病，应通过药敏试验选择敏感药物进行治疗。如没条件作药敏，可选用在当地不常用的药物或新药，当前大肠杆菌对丁胺卡那、头孢噻呋钠、安普霉素、氟苯尼考等敏感率很高，可将其作为治疗药物的首选，交替进行使用。可用硫酸安普霉素250毫克/升水进行饮水，连用3天~5天，在饮水中添加电解多维（按使用）和0.1%的C，连用3天~5天。病情较重的雏鹅可皮下注射头孢噻呋钠0.1毫升/只。 &&&&
　　雏鹅沙门氏菌病鹅沙门氏菌病，又称鹅副寒伤，是由沙门氏杆菌属中的鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌引起的急性或慢性传染病。对雏鹅危害较大，其特征是脐炎，表现腹泻、结膜炎和消瘦等症状。 &&&&
　　症状急性病例常发生在孵出后几天内发病，往往不见症状就死亡，这种情况多是由卵内传递或雏鹅在内接触感染。雏鹅1周龄~3周龄易感性高，表现精神不振，食欲减少或拒食，口渴，喘气，呆立，头下垂，闭眼和眼睑浮肿，两翅下垂。雏鹅排出粥状或水样稀便，当肛门周围被粪便污染干涸后，则堵塞肛门，排便困难。结膜发炎，鼻流浆液性分泌物，羽毛松乱无光泽。经1天~2天，体温升高42℃以上。后期出现神经症状，摇头，角弓反张，全身痉挛，抽搐而死，病程2天~5天。慢性的出现关节炎，跛行，走路蹒跚，共济失调，病程延长，最后衰竭而死，幸存者发育不良，生长缓慢。 &&&&
　　剖检急性病例一般无明显变化。病程稍长时，肝脏肿大，充血，呈古铜色，有黄色斑点和细小的坏死灶，胆囊肿大并充满大量胆汁；肠黏膜充血，呈卡他性肠炎，有点状或块状出血；脾脏肿大呈暗红色，伴有出血条纹或小坏死灶；心包炎，心包内积有浆液性纤维素渗出物，盲肠内有干酪样物质形成栓塞。 &&&&
　　防治防止种蛋污染，保持产蛋箱内卫生，经常更换垫料。每天定时捡蛋，做到产蛋箱不存蛋。每天的种蛋及时分类，消毒后入库，种蛋库的温度应为12℃~14℃，相对湿度75%。种鹅场要做到经常消毒，保持鹅舍清洁、卫生、干燥，种蛋入孵前再进行1次消毒，可防止因种蛋不洁而垂直感染。孵化器、孵化室、运送雏鹅的用具，如筐箱、车辆要严格消毒，以防雏鹅感染。药物治疗，可在中加入0.5%的磺胺嘧啶钠+0.1%的TMP，连用3天~5天，同时多饮水；也可在饲料中加入强力霉素200毫克/千克，连用7天；丁胺卡那注射液肌肉注射，5毫克/千克体重，每天1次，连用2天~3天。在饮水中加入电解多维、维生素C、K3。雏鹅球菌病鹅葡萄球菌病是由金黄色葡萄球菌引起的急性败血性或慢性传染病。雏鹅常表现为急性败血症和脐炎。当饲养管理不当，鹅体表皮破损，抵抗力低下时，可通过伤口和消化道感染。密度大、拥挤、通风不良、空气污浊、饲料单一、缺乏维生素和矿物质等，均可促使本病发生和增大死亡率。 &&&&
　　症状急性败血症型：精神不振，食欲减少或不食，腹部皮下浮肿，严重时皮肤破溃，有红褐色液体。头、尾、背、翅、腿等不同程度出血，炎性坏死，局部干燥结痂，呈暗紫色，跛行。最后逐渐消瘦，卧地不起，如治疗不当，死亡率可达50%左右。脐炎型：在种鹅场、孵化箱内种蛋被致病菌感染，病菌侵入种蛋内，鹅胎盘发育时在脐部或卵黄内增殖，导致部分成为死胎，一部分虽不是死胎，但出壳后多在2日龄~3日龄内发病死亡。病雏精神委顿，怕冷，翅膀下垂，腹部膨大，脐部肿大发炎，局部呈黄红色或黑紫色，质稍硬，间有分泌物，俗称“大肚脐”。 &&&&
　　剖检急性败血症型：全身肌肉、皮肤、黏膜、浆膜发生水肿，充血，出血；肾脏肿大，输尿管充满尿酸盐。有的皮下出血性浸润变化，肝脾坏死，心包炎，肝被膜炎等。脐炎型：腹部皮下有黄色胶冻样浸润，脐部闭合不全，脐口周围组织充血，出血。卵黄囊充血发暗，体积肿大3倍~4倍；脐部肿大，呈紫黑色或紫红色，有暗红色或黄红色液体，时间稍久则为脓样干涸坏死物，卵黄吸收不良，稀薄如水样。 &&&&
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当前时间： 0:31:25禽霍乱+大肠杆菌病二联蜂胶灭活疫苗与油佐剂疫苗注射部位的动态病理组织学比较观察
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