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人T淋巴细胞CD3ε链在原核系统中的融合表达及初步鉴定.pdf79页
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武汉生物制品研究所
硕士研究乍毕业论文
人T淋巴细胞CD3e链在原核系统中的融合表达及初步鉴定
本论文采用原核表达系统pGEX．4T-3分别对正常成人外周血单个核细胞
PBMC 的CD3epsiloncDNA hPCD3￡ 和死胎胸腺细胞的CD3epsilon
hTCD3e 进行了克隆和表达，并分别进行了亲和层析纯化和初步鉴定。
分别以从正常成人外周血单个核细胞 PBMC 和七月龄死胎胸腺细胞中提
DH5tx。从阳性重组子中提取质粒，经酶
pCRII克隆载体连接后转化感受态E．coli
切鉴定得到约4kb的克隆载体片段和约600bp的目的基因片段，与预期结果相符。
将重组克隆质粒进行测序分析，并将其与GenBank中的人CD3e 登录号：
的同源性分别为100％和99％。然后用BamHI／Xh01分别双酶切重组克隆质粒和
表达载体pGEX．4T-3，纯化后连接目的基因片段和表达载体，分别构建
达宿主菌BL21，获得的阳性重组表达质粒经双酶切鉴定和测序分析，获得与重
组克隆质粒完全一致的结果。
1分别在25"C和37。C，
pGEX-4T．3一hPCD3e／BL21和pGEX一4T-3-hTCD3e／BL2
导表达，表达产物经还原型SDS．PAGE电泳鉴定，在约49．5KD处有特异性表达
条带，与预期融合蛋白分子量大小相符。对pGEX．4T-3一hPCD3e／BL2
进行初步优化，在一定的诱导条件范围内，37℃，0．02mmol／LIPTG诱导表达3
和29．3％；在37。C和25。C诱导表达的融合蛋白均主要以包涵体形式存在，有部
分以可溶性形式存在，但在25。C时，诱导的可溶性融合
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台湾国语/香港粤语/日语原声，宫崎骏作品【红猪】Crimson.Pig.1992.日本.XTM.DVD-HALFCD2
红猪.国粤日3语.Crimson.Pig.1992.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
红猪.国粤日3语.Crimson.Pig.1992.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/日语原声，高畑勋作品【再见萤火虫】Grave.Of.The.Fireflies.1988.日本.XTM.DVD-HALFCD2
见萤火虫.国日双语.Grave.Of.The.Fireflies.1988.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
见萤火虫.国日双语.Grave.Of.The.Fireflies.1988.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/香港粤语/日语原声，宫崎骏作品【龙猫】My.Neighbor.Totoro.1988.日本.XTM.DVD-HALFCD2
龙猫.国日粤三语.My.Neighbor.Totoro.1988.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv&
龙猫.国日粤三语.My.Neighbor.Totoro.1988.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/香港粤语/日语原声，宫崎骏学生作品【猫的报恩】The.Cat.Returns.2002.日本.XTM.DVD-HALFCD2
猫的报恩.国粤日3语.The.Cat.Returns.2002.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
猫的报恩.国粤日3语.The.Cat.Returns.2002.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv/
台湾国语/香港粤语/日语原声，高畑勋作品【平成狸合战】Pom.Poko.1994.日本.XTM.DVD-HALFCD2
平成狸合战(百变狸猫).国粤日三语.Pom.Poko.1994.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
平成狸合战(百变狸猫).国粤日三语.Pom.Poko.1994.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/香港粤语/日语原声，宫崎骏作品【千与千寻】Spirited.Away.2001.日本.XTM.DVD-HALFCD2（cd3
repacked）
千与千寻.国粤日3语.Spirited.Away.2001.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
千与千寻.国粤日3语.Spirited.Away.2001.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
千与千寻.国粤日3语.Spirited.Away.2001.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd3.mkv
台湾国语/日语原声，宫崎骏作品【天空之城】Castle.In.The.Sky.1986.日本.XTM.DVD-HALFCD2
天空之城.国日双语.Castle.In.The.Sky.1986.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
天空之城.国日双语.Castle.In.The.Sky.1986.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
天空之城.国日双语.Castle.In.The.Sky.1986.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd3.mkv
台湾国语/日语原声，宫崎骏学生作品【听见涛声】The.Ocean.Waves.1993.日本.XTM.DVD-HALFCD2
听见涛声.国日双语.The.Ocean.Waves.1993.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
听见涛声.国日双语.The.Ocean.Waves.1993.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/日语原声，高畑勋作品【我的邻居山田君】My.Neighbors.The.Yamadas.1999.日本.XTM.DVD-HALFCD2
我的邻居山田君.国日双语.My.Neighbors.The.Yamadas.1999.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
我的邻居山田君.国日双语.My.Neighbors.The.Yamadas.1999.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/日语原声，宫崎骏作品【幽灵公主】国粤双语.Princess.Mononoke.1997.日本.XTM.DVD-HALFCD2
幽灵公主.国粤双语.Princess.Mononoke.1997.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv&
幽灵公主.国粤双语.Princess.Mononoke.1997.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
八一公映国语配音/英语，全国院线热映中！汤姆·克鲁斯主演【行动目标希特勒】Valkyrie.2Audio.2008.美国.XTM.BD-HALFCD2
8.9，草台国语配音/英语，克里斯蒂安·贝尔/希斯·莱杰，蝙蝠侠前传之二【蝙蝠侠.黑暗骑士】The.Dark.Knight.2Audio.2008.美国.XTM.BD-HALFCD2
8.4，上译公映国语/中录京译国语/英语，克里斯蒂安·贝尔主演，蝙蝠侠前传之一【蝙蝠侠诞生】Batman.Begins.3Audio.2005.美国.XTM.BD-HALFCD2
中录华纳京译国语配音/英语，乔治·克鲁尼/阿诺德·施瓦辛格，蝙蝠侠系列之四【蝙蝠侠与罗宾】Batman.and.Robin.2Audio.1997.美国.XTM.BD-HALFCD2
中录华纳京译国语配音/英语，瓦尔·基尔默/金·凯瑞/妮可·基德曼，蝙蝠侠系列之三【永远的蝙蝠侠】Batman.Forever.2Audio.1995.美国.XTM.BD-HALFCD2
中录华纳京译国语配音/英语，迈克尔·基顿主演，蝙蝠侠系列之二【蝙蝠侠归来】Batman.Returns.2Audio.1992.美国.XTM.BD-HALFCD2
中录华纳京译国语配音/英语，迈克尔·基顿主演，蝙蝠侠系列之一【蝙蝠侠】Batman.2Audio.1989.美国.XTM.BD-HALFCD2
泰盛正版北影公映国语/英语，丹尼尔·克雷格/朱迪·丹奇，007系列第22部【007
大破量子危机】Quantum.of.Solace.2Audio.2008.英国.XTM.BD-HALFCD2
泰盛正版北影公映国语/台配/六区草配国语/粤语/英语，迪斯尼人气动画，【闪电狗】Bolt.5Audio.2008.美国.XTM.BD-HALFCD2
录像带内参国语配音/英语，罗杰·摩尔主演，007系列之十一【太空城】Moonraker.2Audio.1979.美国.XTM.BD-HALFCD2
北影内参国语配音/英语，肖恩·康纳利主演，007系列之三【金手指】Goldfinger.2Audio.1964.XTM.BD-HALFCD2
中录京译国语配音/英语，皮尔斯·布鲁斯南主演，007系列之十九【黑日危机】The.World.Is.Not.Enough.2Audio.1999.美国.XTM.BD-HALFCD2
北影内参国语/内参国语2/英语，罗杰·摩尔主演，007系列之八【金枪人】the.Man.With.The.Golden.Gun.3Audio.1974.美国.XTM.BD-HALFCD2
台湾国语/香港粤语/英语原声，皮克斯动画【虫虫特攻队】A.Bug's.Life.1998.美国.XTM.BD-HALFCD2
京译国语配音/英语，派拉蒙爆笑动画【疯狂牧场】Barnyard.2Audio.2006.美国.XTM.720pp-HALFCD2
上译国语/法语，永不消逝的经典【最后一班地铁】The.Last.Metro.2Audio.1980.法国.XTM.BD-HALFCD2
长影公映国语配音/台配国语/粤语/英语，梦工厂爆笑动画【马达加斯加】Madagascar.4Audio.2005.美国.XTM.1080P-HALFCD2
华纳正版八一公映国语配音/英语，彼得·杰克逊导演，【金刚.加长版】King.Kong.2Audio.2005.EE.美国.XTM.BD-HALFCD2
上译公映国语配音/英语，威尔·史密斯主演，【我.机器人/机械公敌】I.Robot.2Audio.2004.美国.XTM.BD-HALFCD2
台湾国语/日语，酒井若菜/元彪/钱家乐/倪星（邹兆龙）/李灿森【无问题2】国日双语.No.Problem.2.2002.日本.XTM.DVD-HALFCD2
没问题2.国日双语.No.Problem.2.2002.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
没问题2.国日双语.No.Problem.2.2002.日本.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/英语原声，罗曼·波兰斯基导演，休·格兰特/克里斯汀·托马斯【苦月亮】Bitter.Moon.1992.美国.XTM.DVD-HALFCD2
苦月亮.国英双语.Bitter.Moon.1992.美国.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
苦月亮.国英双语.Bitter.Moon.1992.美国.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
台湾国语/英语原声，一代天骄射大雕【成吉思汗】Genghis.Khan.2005.英国.XTM.DVD-HALFCD2
上译国语配音/英语，凯特·哈德森/马修·麦康纳，【淘金俏冤家】Fools.Gold.2008.美国.XTM.BD-HALFCD2
八一厂公映国语配音/韩语，崔智友/郑俊河/金秀路，【无影剑】Shadowless.Sword.2Audio.2005.韩国.XTM.BD-HALFCD2
IMDB评分 8.1
上译国语配音/德语，莫里兹·布雷多/弗兰卡·波坦特，【罗拉快跑】Run.Lola.Run.2Audio.1998.德国.XTM.BD-HALFCD2
台湾国语/韩语原声，李英爱/刘智泰，韩国经典爱情片【春逝】国韩双语.One.Fine.Spring.Day.2001.韩国.XTM.DVD-HALFCD2
春逝.国韩双语.One.Fine.Spring.Day.2001.韩国.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
春逝.国韩双语.One.Fine.Spring.Day.2001.韩国.XTM.DVD-HALFCD2-cd2.mkv
八一公映国语配音/英语，迈克尔·贝导演，本·阿弗莱克/乔什·哈奈特/强·沃特，【珍珠港】Pearl.Harbor.2Audio.2001.美国.XTM.BD-HALFCD2
21，上译内参国语配音/英语，斯蒂芬·鲍尔文/凯文·斯帕西，【非常嫌疑犯】The.Usual.Suspects.2Audio.1995.美国.XTM.BD-HALFCD2
上译公映国语配音/法语，贝诺特·波维德/娜塔莎·林德格【时空穿越者】Deux.Les.Mondes.2Audio.2007.法国.XTM.BD-HALFCD2
中录正版长影公映国语/台配/粤语/英语，梦工厂爆笑动画【马达加斯加2.逃往非洲】Madagascar.Escape.2.Africa.4Audio.2008.美国.XTM.BD-HALFCD2
奥斯卡经典，央视国语配音/英语，乔治·克鲁尼/西恩·潘/约翰·区沃塔【细细的红线/红色警戒】The.Thin.Red.Line.2Audio.1998.美国.XTM.DVD-HALFCD2
台湾国语/香港粤语/英语原声，妮可儿·基德曼/休·杰克曼配音【快乐的大脚】Happy.Feet.2006.美国.XTM.BD-HALFCD2
日本锁国.日粤双语.Vexille..日本.XTM.DVD-HALFCD2
台湾国语/日语原声【甲虫王者
迈向伟大的三冠王之路】The.King.Of.Beetles-The.Road.To.The.Greatest.Champion.2007.日本.XTM.DVD-HALFCD2
泰盛正版八一公映国语配音/英语，尼古拉斯·凯奇/黛安·克鲁格，【国家宝藏2.夺宝秘笈】National.Treasure.Book.of.Secrets.2Audio.2007.美国.XTM.BD-HALFCD2
泰盛正版八一公映国语配音/英语，尼古拉斯·凯奇/黛安·克鲁格，【国家宝藏】National.Treasure.2Audio.2004.美国.XTM.BD-HALFCD2
央视国语配音/英语，金·凯瑞/艾德·哈里斯，【楚门的世界】The.Truman.Show.2Audio.1998.美国.XTM.BD-HALFCD2
最新中录京译国语配音/英语，萨拉·杰西卡·帕克/吉姆·坎特拉尔，【欲望都市电影版】Sex.And.The.City.2Audio.2008.美国.XTM.BD-HALFCD2
长影公映国语/英语，马特·达蒙主演，【谍影重重3.最后通牒】The.Bourne.Ultimatum.2Audio.2007.美国.XTM.BD-HALFCD2
中录环球京译国语/英语，马特·达蒙主演，【谍影重重2】The.Bourne.Supremacy.2Audio.2004.美国.XTM.BD-HALFCD2
长影公映国语/中录环球京译国语/英语，马特·达蒙主演，【谍影重重】The.Bourne.Identity.3Audio.2002.美国.XTM.BD-HALFCD2
北影内参国语/英语，马龙·白兰度主演，【教父3】The.Godfather.III.2Audio.1990.美国.XTM.BD-HALFCD2
3，北影内参国语/英语，马龙·白兰度主演，【教父2】The.Godfather.II.1974.2Audio.美国.XTM.BD-HALFCD2
2，北影内参国语/英语，马龙·白兰度主演，【教父】The.Godfather.2Audio.1972.美国.XTM.BD-HALFCD2
台配国语/法语原声，法国温情故事片【第八日】The.Eighth.Day.1996.法国.XTM.DVD-HALFCD2
第八日.国法双语.The.Eighth.Day.1996.法国.XTM.DVD-HALFCD2-cd1.mkv
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