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学位授予单位：&
授予学位：硕士
学位年度：2009
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摘要:（该内容经过伪原创处理，请直接查看目录）猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒惹起猪的一种高度接触性沾染病，给世界养猪业形成了伟大经济丧失。在我国，猪瘟仍然是伤害养猪业最为严重的疫病之一。今朝在我国养猪业中，多运用兔化弱毒脾淋苗或细胞苗预防猪瘟。但是，在猪瘟抗体程度较高的猪群中，有的仍产生猪瘟。为评价这两种疫苗的细胞免疫后果，停止了比拟研讨。本实验采取惯例白细胞计数、流式细胞技巧、淋巴细胞转化实验、ELISA试剂盒对猪瘟兔化弱毒细胞苗免疫仔猪(以下简称细胞苗组)、脾淋苗免疫仔猪(有两组，以下分离简称脾淋苗A组、脾淋苗B组)和打针心理盐水的仔猪(简称对比组)分离停止重要免疫相干目标的测定，成果以下1、猪外周血CD3+、CD4+、CD8+亚群分型测定免疫后第1、7、14、24和35天细胞苗组CD3+淋巴细胞比例低于两个脾淋苗组，但差别不明显；CD4+淋巴细胞亚群比例由高至低顺次为两个脾淋苗组、对比组、细胞苗组，个中于第1天差别明显；组内各时光点CD4+/CD8+比值只要细胞苗组差别明显，且细胞苗组CD4+/CD8+比值一直低于两个脾淋苗组，个中于第35天差别明显。2、猪外周血淋巴细胞增殖活性测定免疫后第1、3、7、14、24和35天植物血凝素非特异性淋巴细胞活气由高至低顺次为脾淋苗A组、脾淋苗B组、细胞苗组和对比组，个中于第3和7天差别明显；免疫后7天起猪瘟兔化弱毒特异性淋巴细胞活气由高至低顺次为脾淋苗A组、脾淋苗B组、细胞苗组和对比组，个中于第14天差别明显。3、猪外周血细胞因子程度测定免疫后第1、3、7、14、24和35天IFN一γ程度由高到低顺次为脾淋苗A组、脾淋苗B组、细胞苗组和对比组，个中于第1、3、7、14和24天差别明显；脾淋苗A组IL一3程度一直高于其他组，而对比组一直最低。细胞苗组IL一3程度于免疫后7天内低于脾淋苗B组，7天后高于脾淋苗B组。个中于第1、3、7、14、24和35天差别明显。4、血惯例检测猪外周血白细胞、淋巴细胞总数组间差别不明显，且组内各日龄差别亦不明显。综合以上实验成果可见，与猪瘟兔化弱毒细胞苗比拟，猪瘟兔化弱毒脾淋苗免疫猪具有高比例的CD3+和CD4+淋巴细胞亚群，高而稳固的CD4+/CD8+比值，高活气的淋巴细胞和高程度的IFN一γ和IL一3，注解猪瘟兔化弱毒脾淋苗的细胞免疫后果更加显著，为猪瘟疫苗的选择供给了迷信根据。
Abstract:Classical swine fever (CSF) by classical swine fever virus that causes swine a highly contagious infectious disease, to the world's pig industry formed a great economic loss. In our country, swine fever disease is still one of the most serious harm to the pig industry. At present in pig industry in China, using lapinized spleen vaccine or vaccine to prevent swine fever. But, in a higher degree of swine fever antibody in pigs, some still have a fever. In order to evaluate the cellular immune effect of these two kinds of vaccines, the comparative study was stopped. 本实验采取惯例白细胞计数、流式细胞技巧、淋巴细胞转化实验、ELISA试剂盒对猪瘟兔化弱毒细胞苗免疫仔猪(以下简称细胞苗组)、脾淋苗免疫仔猪(有两组，以下分离简称脾淋苗A组、脾淋苗B组)和打针心理盐水的仔猪(简称对比组)分离停止重要免疫相干目标的测定，成果以下1、猪外周血CD3 、CD4 、CD8 亚群分型测定免疫后第1、7、14、24和35天细胞苗组CD3 淋巴细胞比例低于两个脾淋苗组，但差别不明显；CD4 淋巴细胞亚群比例由高至低顺次为两个脾淋苗组、对比组、细胞苗组，个中于第1天差别明显；组内各时光点CD4 /CD8 比值只要细胞苗组差别明显，且细胞苗组CD4 /CD8 比值一直低于两个脾淋苗组，个中于第35天差别明显。 Immune 2, swine peripheral blood lymphocytes proliferation assay after 1, 3, 7, 14, 24 and 35 days plant hemagglutinin non specific lymphocyte vitality from high to low in sequence, the spleen and lymph vaccine group A, spleen and lymph vaccine group B, cell vaccine group and contrast group, medium on the 3rd and 7 7 days after immunization of classical swine fever in rabbits of attenuated virus specific lymphocyte vitality by high to low in sequence for the spleen and lymph vaccine group A, spleen and lymph vaccine group B, cell vaccine group and contrast group, medium on the 14th day difference. 3, swine week blood cell factor level was measured by immunofluorescence after 1, 3, 7, 14, 24 and 35 days IFN a gamma level from high to low in sequence for the spleen and lymph vaccine group A, spleen and lymph vaccine group B, cell vaccine group and contrast group, medium on the 1, 3, 7, 14 and 24 spleen and lymph vaccine group a IL 3 degree has been higher than other groups, while the comparison group is always the lowest. The IL group in the cell seeding group was lower than that in B group at 7 days after immunization, and 7 days later, the B group was higher than that in spleen. In the first, 7, 14, 3, 24 and 35 days, the difference was obvious. 4, blood routine test of blood white blood cells, lymphocytes, the total number of differences between the group is not obvious, and the difference between the groups of the age is not obvious. Based on the above experimental results visible, and hog cholera rabbit of attenuated vaccine of analogy, hog cholera rabbit of weak spleen virus lymph vaccine Pig has a high percentage of CD3 and CD4 lymphocyte subsets, high and stable CD4 / CD8 ratio, high vitality of lymphocytes and a high degree of IFN gamma and IL 3. Note the hog cholera rabbit weak spleen virus Lin Miao cell immunologic consequences more significant, for classical swine fever vaccine supply the according to superstition.
目录:摘要7-9ABSTRACT9-10第一部分 绪论11-38&&&&1 猪瘟的概述11-23&&&&&&&&1.1 猪瘟的简介11-12&&&&&&&&1.2 猪瘟的危害12-14&&&&&&&&1.3 猪瘟的流行情况14-17&&&&&&&&1.4 猪瘟的防治17-18&&&&&&&&1.5 猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）18-23&&&&2 猪瘟免疫的研究进展23-36&&&&&&&&2.1 猪瘟与体液免疫23-26&&&&&&&&2.2 猪瘟与细胞免疫26-36&&&&3 研究目的及意义36-38第二部分 正文38-74&&&&1 材料与方法38-42&&&&&&&&1.1 材料38-40&&&&&&&&1.2 方法40-42&&&&2 结果与分析42-68&&&&&&&&2.1 血常规结果42-44&&&&&&&&2.2 流式细胞仪检测CD3~+、CD4~+、CD8~+亚群结果44-51&&&&&&&&2.3 外周血淋巴细胞增殖活性检测结果51-54&&&&&&&&2.4 猪外周血细胞因子浓度检测结果54-57&&&&&&&&2.5 仔猪循环抗体检测结果57-64&&&&&&&&2.6 生长性能64-66&&&&&&&&2.7 猪主要病毒病的检测66-68&&&&3 讨论68-73&&&&&&&&3.1 关于选择试验动物的问题68&&&&&&&&3.2 关于本试验中统计学的问题68-69&&&&&&&&3.3 关于试验中血液样本的处理69&&&&&&&&3.4 关于淋巴细胞亚群变化的问题69-70&&&&&&&&3.5 关于淋巴细胞增殖试验70-71&&&&&&&&3.6 关于细胞免疫的问题71-72&&&&&&&&3.7 关于疫苗的理性选择72-73&&&&4 结论73-74参考文献74-85致谢85
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来源：广东养猪网
采用猪瘟脾淋苗控制猪瘟的成功经验
东莞喜牧动物药品有限公司
曹学导、吴瑞云
　　今年9月份以来广东博罗地区一些猪场陆续出现了死亡率较高、损失较大的猪瘟病情，某场初生仔猪腹泻，仔猪死亡率偏高，断乳仔猪整齐度成活率低；某猪场产房仔猪均匀度差，死亡率高，母猪奶水不足，保育阶段猪只急性发病；这两个案例通过剖检病猪，实验室血清学检测报告分析，以及根据我们建议方案采取措施后猪群的康复好转情况，可以非常肯定发生了猪瘟疫情。现将这两个案例介绍如下。
　　情况：某250头母猪存栏自繁自养场，自9月下旬开始分娩一周内至10天龄仔猪出现腹泻，拉黄色稀粪，严重的脱水，后期仔猪初分娩当天就出现水样腹泻，发病率达到60%，发病猪死亡率近90%；到场检查其断乳前后仔猪，发现猪只精神较差，个别猪腹部奶头发紫，部分出现拉稀、精神萎靡、关节肿大、不吃料、扎堆，剖检初生仔猪及断乳猪均见淋巴结坏死、肾脏出现针尖状出血点、个别膀胱见明显出血点，怀疑是猪瘟病毒感染导致。（如下图）
　　方法：
　　采用猪瘟脾淋苗零免初生仔猪2头份/头，为期1个月（待母猪接种猪瘟苗1个月后停止）；断乳仔猪全群接种猪瘟脾淋苗2头份/头（10月11日），10月9日母猪群全群接种脾淋苗4头份/头。此外，及时淘汰部分严重发病猪只。
　　结果：
　　10月4日开始实施仔猪脾淋苗零时免疫，10月上旬已在现场见到仔猪腹泻拉稀停止，只有个别仔猪因母猪奶水不足导致拉稀（3%以内），但治疗都能康复；该场技术员还用某厂家零免猪瘟苗（细胞源）做了几窝初生仔猪的零时免疫，发现仔猪在一周龄后体膘、毛色差异特别明显，采用脾淋苗零免仔猪毛色红润、体膘饱满，无一只仔猪拉稀，均匀度好，而采用零免苗免疫仔猪仍有拉稀粪的情况，体膘较差，均匀度差。后该场10月初至11月10日前后分娩仔猪约30多窝全部采用脾淋苗实施零时免疫。11月上旬现场也见到10月10日前后免疫过猪瘟脾淋苗的断乳仔猪生长良好，巡视产房及保育舍猪群情况，基本见不到病猪，场主和技术员、饲养员都相当满意。（如图）
　　其它：
　　零免仔猪（10月7-9日）在30天龄采集部分猪血清、紧急接种猪瘟脾淋苗（10月11日）之断乳仔猪在接种30天后采集部分猪血清、母猪群在接种30天后采集部分猪血清（全部为10月10日采血）送省种猪测定中心检测室检测猪瘟抗体（结果如下表）。所见母猪抗体水平尚可，一头抗体介于有保护力和无保护力之间，可能为感染猪或其它原因；零免仔猪猪瘟抗体一头为&零&抗体，一头无保护力，分析可能跟栏舍消毒不彻底致猪只感染或抗体已下降有关系；断奶后免疫过脾淋苗的保育猪猪瘟抗体差异大，甚至呈&零抗体&，可能跟当时猪群猪瘟感染已成散发状态、一些猪已感染（剖检病弱猪已见猪瘟的病理变化）、同居生活导致猪瘟抗体差异，该猪群须加强免疫。
　　情况：某200头母猪存栏自繁自养场，9月26日来电要求到现场，到场后场主描述说该场一栋保育栏18-20kg左右保育猪最近几天出现部分猪采食减退、发烧、部分耳朵发紫、皮肤发红、个别死亡，怀疑为高致病性蓝耳病；到保育栏所见120多头保育猪整体精神体膘尚可，日龄在30天龄左右，大部分猪毛色正常，但出现嗜睡扎堆情形，挑出两栏约20多头病猪已出现严重病情，卧地不起、几头耳朵完全呈紫黑色、个别消瘦、被毛粗乱等。剖检两头见明显的猪瘟病理变化（如图）！当即建议对保育舍猪群紧急免疫猪瘟脾淋苗2.5头份/头，并且建议场主对全群种猪及产房刚断奶仔猪进行脾淋苗的加强免疫，因该场一贯用政府免费猪瘟疫苗免疫，笔者指出现场所见免疫效果是得不到保障的。10月份去电了解该批猪群仍然有10多头死亡，但后续无继续发病情形，有个别耳朵已呈紫色猪只都得到康复，正常生长。
　　然而11月10日该场老板又来电说又一批保育猪又发病了，猪群发烧、食料减少，到场剖检保育病猪，巡查产房仔猪，并且在产房挑出不同日龄残弱仔猪剖检，病理变化所见仍然是猪瘟的问题。询问方知该场老板在9月底接种疫苗控制好该批保育猪后，笔者建议对母猪群及断奶仔猪采用猪瘟脾淋苗加强免疫并没有得到实施，场主在10月份只是对母猪群接种了蓝耳弱毒疫苗。这次再次诊断为猪瘟感染后，即对保育猪群采用脾淋苗紧急接种，对15天龄以上至断奶后仔猪也接种脾淋苗2头份/头，对母猪群接种脾淋苗4头份/头，即刻开始至接种母猪疫苗一个月内分娩仔猪实施脾淋苗的零时免疫（1头份/头）。笔者于11月25日到场回访，保育猪群已完全康复，期间分娩的产房仔猪不再见到下痢、精神萎靡、关节肿大、眼脸水肿、被毛松乱、残弱猪比例大等上次（11月10日）所见情形，实施了零时免疫仔猪健康非常良好！（如图）
　　脾淋苗因其组织苗的特性一般都不主张用在仔猪零时免疫上，如今脾淋苗可以用在仔猪零免，笔者从业十几年及翻阅资料等还是首次听说，并且成功实践在生产上。
　　A例场本来建议零免时是用1头份/头，但该场技术员出于想尽快控制病情的目的在实施中用了2头份/头，并且观察无任何副反应，效果也相当理想。
　　这两个案例表明，在发瘟疫情时采用优质脾淋苗控制猪瘟病情发展及猪只死亡方面，脾淋苗较细胞苗优势突出，能起到快速、有效的作用。对此，我们多年的技术服务经历也深有体会。
　　我们近年临床所见，猪瘟在生产场中有抬头的趋势，并且在很多场采用疫苗控制好蓝耳病和圆环病毒病之后，猪瘟的临床表现见到急性死亡、喘气、皮肤苍白、甚至神经症状等案例，不综合分析往往会引起误判，导致重大损失。
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